概述
5’-RACE試劑盒包含逆轉(zhuǎn)錄酶、重組末端轉(zhuǎn)移酶和擴(kuò)增酶。Reverse Transcriptase Mix（RNase H-）含有dNTP、RNase Inhibitor、Reverse Transcriptase、Reverse Transcriptase Buffer等，逆轉(zhuǎn)錄酶可逆轉(zhuǎn)錄全長15kb的cDNA片段，具有高靈敏度和快速擴(kuò)增等特點(diǎn)，由于其熱穩(wěn)定性高（高達(dá)55°C），對于富含GC或具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的RNA模板有明顯優(yōu)勢。該逆轉(zhuǎn)錄酶可以實(shí)現(xiàn)高效的cDNA合成。本試劑盒應(yīng)用了套式（巢式）PCR原理，用嵌套的特異性引物和PCR錨定引物，增加了PCR擴(kuò)增的特異性與靈敏度，可以對少量樣品或低豐度的基因進(jìn)行5’RACE實(shí)驗(yàn)，并且對長片段的5’RACE擴(kuò)增具有明顯優(yōu)勢。Taq SuperMix含有dNTP、Mg2+、Taq酶、Buffer等，擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物的3’端附有一個(gè)“A”堿基，可直接克隆于T-Vector中測序，如條帶單一可以直接用R2引物測序。試劑盒中提供的Control Total RNA，使用Control Primer可擴(kuò)增出Human（GAPDH）基 因5’末端391 bp的DNA片段。
特點(diǎn)
- 1. 高靈敏度：采用了套式PCR法，對低豐度的基因或極少量的RNA樣品同樣可以進(jìn)行5′RACE實(shí)驗(yàn)。
- 2. 高特異性：高保真的擴(kuò)增酶，保證擴(kuò)增的特異性。
- 3. 長片段：試劑盒中使用了本公司特殊改良的M-MLV（RNase H-）反轉(zhuǎn)錄酶，反轉(zhuǎn)錄性能優(yōu)良，最長合成片段15kb。
應(yīng)用
快速擴(kuò)增全長，用于功能基因的研究、蛋白表達(dá)等。
使用說明
試劑盒中提供的Taq SuperMix、Reverse Transcriptase Mix（RNase H-）用完后及時(shí)放入-20°C凍存。
組份
5'adaptor Primer、5'RACE Outer Primer、5'RACE Control Outer Primer、5'RACE Control Inner Primer、dCTP、Control Total RNA、RNase H Mix、5×TdT Buffer、TdT酶、RNase-free water、Reverse Transcriptase Mix（RNase H-）、Taq SuperMix
適用樣本
動物、植物、病毒等
