偽狂犬病病毒PCR試劑盒(Pseudorabies Virus,PrV)又稱豬皰疹病毒Ⅰ型、傳染性延髓麻痹病毒、奇癢癥病毒、奧葉茲基氏病病毒。是引起牛、羊、豬、犬和貓等多種家畜和野生動物發熱、奇癢(豬除外)及腦脊髓炎為主要癥狀的皰疹病毒。由于本病的臨床癥狀類似狂犬病,故也用“偽狂犬病”這一病名。偽狂犬病與狂犬病毒并沒有關系,而是屬于皰疹病毒。因此快速靈敏檢測偽狂犬病病毒具有重要意義。本產品就是為此目的根據 PCR 原理開發的試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。
2. 引物經過精心優化,專一性強,只擴增偽狂犬病病毒,與其他微生物沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
本試劑盒足夠做 40μL 體系的PCR 50 次,但只能用于科研。
成份 | 編號 | 十孔盒包裝 |
PCR MagicMix 3.0 | 90805 | 1 mL(紅蓋) |
超純水 | 100935 | 1 mL(亮黃色) |
偽狂犬病病毒PCR 引物混合液 | 同 13-35100yw | 100 μL(白蓋) |
偽狂犬病病毒PCR 陽性對照 (1×10E8 拷貝/μL) | 同 60908-35100pc | 50 μL(黃蓋) |
天凈沙核酸釋放劑(試用裝) | 61202 | 20 次(1 mL,綠蓋) |
使用手冊 | 同 13-35100sc | 1 份 |
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,不要污染其
他試劑
樣品 DNA
一、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數核酸提取試劑盒兼容。本試劑盒免費贈送 20 次天凈沙核酸釋放劑試用裝,其使用手冊可以從本公司網站天凈沙核酸釋放劑或產品編號 61202 下載。
2. 如果有 N 個樣品,則需要做 N+2 個提取,包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得,樣品
制備陰性對照是直接用水。提取結束后最后得到模板 DNA 放冰上待用
二、設置PCR 反應(40μL 體系)
3. 對 N+2 個樣品,在PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照,故需要設置 N+4 個反應。在 N+4 個PCR 管中分別加入下列成分:
成分N+2 個PCR 陰性PCR 陽性
樣品管對照對照
PCR MagicMix 3.0各 20 μL20 μL20 μL
偽狂犬病病毒 PCR 引物各 2 μL2 μL2 μL混合液
N+2 個樣品 DNA 模板各 18 μL--
PCR 陰性對照(水)-18 μL-
PCR 陽性對照(偽狂犬病
病毒 PCR 陽性對照的--18 μL 1000 倍稀釋液)
4. 按下表設置 PCR 反應:
、電泳檢測
取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix在擴增結束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。預期的 PCR產物長度為 100bp。陽性對照必須有條帶出現,陰性對照必須無任何擴增, 否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。