超級核酸酶(≥99%) Super Nuclease, ≥99%)是一種來源于粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)的非特異性核酸內(nèi)切酶，可在非常寬泛的條件下降解單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀、天然或變性等各種形式的DNA或RNA，產(chǎn)生長度為3至5個堿基的5'-單磷酸寡核苷酸。本產(chǎn)品用途廣泛，常用于重組蛋白、病毒疫苗等生物制品中去除核酸，以及有效降低細胞、組織、微生物等蛋白裂解液樣品的粘度等。
本產(chǎn)品為超純級，純度≥99%，無蛋白酶活性，內(nèi)毒素極低，<0.25EU/KU。
超級核酸酶，又稱全能核酸酶或廣譜核酸酶，與Benzonase endonuclease、TurboNuclease等類似酶的氨基酸序列基本一致(主要是蛋白的氨基端或羧基端所帶的標簽或殘留氨基酸序列略有不同)，具有同樣的酶催化活性和相同的用途，大多數(shù)情況下可以相互替代。具體使用時，需要注意純度和內(nèi)毒素水平對于后續(xù)分析檢測的影響。
超級核酸酶的穩(wěn)定性非常好。37℃保存3-5周，超級核酸酶能保持>90%的酶活性，在25℃保存10周后，酶活性基本沒有變化。
超級核酸酶采用PerfectProtein™技術(shù)平臺表達、純化，表達純化獲得的重組蛋白與Serratia marcescens中的天然核酸內(nèi)切酶氨基酸序列完全一致，沒有額外的標簽，沒有額外的氨基酸，與天然粘質(zhì)沙雷氏菌的核酸內(nèi)切酶相比在生化特性方面相同。和本產(chǎn)品相似的帶有His tag的為超級核酸酶(≥99%, with His-tag) (D7126)單獨有售。本產(chǎn)品的基本信息如下表：
| 蛋白信息(About this protein) | |
| 名稱(Name) | 超級核酸酶 |
| 別名(Synonyms) | 全能核酸酶，廣譜核酸酶，活性核酸酶，Benzonase Nuclease，Benzonase Endonuclease，TurboNuclease，Universal Nuclease |
| CAS號(CAS No.) | 9025-65-4 |
| 分子量(MW) | ~26.7kDa |
| 外觀(Physical appearance) | 液體 |
| 活性(Biological activity) | 250U/μl |
| 活力單位(Unit definition) | One unit of Super Nuclease is defined as the amount of enzyme that causes a ∆A260 of 1.0 (equivalent to the complete digestion of 37μg DNA) in 30min. |
| 純度(Purity) | ≥ 99% by SDS-PAGE, protease-free |
| 配方(Formulation) | 10mM Tris (pH7.4), 500mM NaCl, 2mM MgCl2, 50% glycerol |
| 內(nèi)毒(Endotoxin) | <0.25EU/KU by LAL |
| 產(chǎn)品用途(Applications) | 有效去除重組蛋白中的核酸；有效去除病毒疫苗和普通重組病毒中的核酸，使其符合FDA指南中核酸污染的要求；實時定量PCR測定重組病毒滴度時去除病毒包裝細胞的核酸和包裝質(zhì)粒；降低細菌或細胞裂解液由核酸導(dǎo)致的粘度使其易于后續(xù)操作；防止細胞成團；提高包涵體蛋白(inclusion bodies)復(fù)性率；在二維凝膠電泳(two-dimensional electrophoresis, 2-DE)的過程中，提高蛋白質(zhì)的分離效率和雙向電泳的分辨率。 |
本產(chǎn)品內(nèi)毒素極低。本產(chǎn)品經(jīng)去內(nèi)毒素處理，經(jīng)鱟試劑(Limulus Amebocyte Lysate, LAL)比色法檢測內(nèi)毒素含量<0.25EU/KU。
本產(chǎn)品適用范圍寬。超級核酸酶需1-2mM Mg2+作為輔助因子促進其酶活性，最適范圍(Optimal Range, Enzyme Activity >90%)和有效范圍(Effective Range, Enzyme Activity >15%)見下表。
| Condition | Optimal Range | Effective Range |
| Mg2+ | 1-2mM | 1-10mM |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0-10.0 |
| Temperature | 37℃ | 0-42℃ |
| DTT | 0-100mM | >100mM |
| 2-Mercaptoethanol | 0-100mM | >100mM |
| Na+, K+, NH4+ | 0-20mM | 0-150mM |
| PO43- | 0-10mM | 0-100mM |
| Triton X-100 | / | <0.4% |
| Sodium deoxycholate | / | <0.4% |
| SDS | / | <0.05% |
| Urea | / | <5M |
| (NH4)2SO4 | / | <100mM |
本產(chǎn)品活性好，效果佳。超級核酸酶與國外同類產(chǎn)品Competitor M對質(zhì)粒DNA的消化效果參考圖1。 如圖所示，本產(chǎn)品與Competitor M相比，效果基本一致甚至略好。
圖1.超級核酸酶(≥99%)消化質(zhì)粒DNA的效果圖。在50μl反應(yīng)體系(10mM Tris pH8.0, 2mM MgCl2)中，加入5μg質(zhì)粒DNA，及相應(yīng)量的本產(chǎn)品或Competitor M，37℃孵育30min，反應(yīng)完畢后立即置于冰浴，并加入1μl 0.5M EDTA以終止反應(yīng)。取出10μl反應(yīng)產(chǎn)物，加入2μl DNA上樣緩沖液(6X) (D0071)，在1%瓊脂糖凝膠中電泳檢測。實際效果會因樣品種類、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
本產(chǎn)品可有效降低細胞或細菌裂解液粘度。超級核酸酶有效降低哺乳動物細胞或細菌裂解液粘度的效果圖參考圖2。
圖2.超級核酸酶(≥99%)降低細胞或細菌裂解液粘度的效果圖。A. HEK293細胞經(jīng)RIPA裂解液(強) (P0013B)裂解后，未加超級核酸酶的樣品因大量基因組DNA釋放成粘稠狀，而經(jīng)過終濃度25和250U/ml室溫處理15min的樣品不粘稠；B. 按照每克E.coli BL21(DE3)濕菌加入5ml RIPA裂解液(P0013B)的比例設(shè)置4組樣品，分別加入相應(yīng)量的本產(chǎn)品，室溫處理30min，低速(350g×g)離心3min，未經(jīng)超級核酸酶處理的樣品因粘稠物質(zhì)較多導(dǎo)致大量細菌碎片懸浮在管中，加入超級核酸酶的樣品隨著超級核酸酶量的增加，粘度逐漸降低，上清逐漸增多且澄清；C. 取B中10μl上清在1%瓊脂糖凝膠中電泳檢測，加入超級核酸酶樣品的基因組DNA被降解為小片段。實際效果會因樣品種類、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。
在最適反應(yīng)條件下，超級核酸酶對于不同樣品的推薦用量和處理時間請參考下表。注：實際用量和處理時間需根據(jù)樣品的實際情況進行一定的摸索，若使用的溶液較為特殊，如為高鹽溶液，或偏酸性、偏堿性，或含有較高濃度的去垢劑、變性劑等，應(yīng)適當增加超級核酸酶的用量或孵育時間。
| 實驗類型 | 蛋白樣品制備 | 非藥物蛋白生產(chǎn) | 藥物蛋白生產(chǎn) | 疫苗、病毒生產(chǎn) | 細胞藥物 |
| 推薦產(chǎn)品 | (with His-tag) | ||||
| 細胞或樣品數(shù)量 | 1×108個細胞 (1ml裂解液) | 1g濕重 (重懸液5ml) | 1L發(fā)酵上清液 | 1L培養(yǎng)物 | |
| 最低終濃度 | 2.5U/ml | 2.5U/ml | 2.5U/ml | 0.1U/ml | 0.1U/ml |
| 推薦終濃度 | 25-250U/ml | 25-250U/ml | 25-250U/ml | 5-25U/ml | 1-5U/ml |
| 處理時間 | 5~60min (37℃)或30~120min (25℃) | ||||
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝 |
| D7121-5KU | 超級核酸酶(≥99%) | 250U/μl×20μl |
| D7121-25KU | 超級核酸酶(≥99%) | 250U/μl×100μl |
| D7121-100KU | 超級核酸酶(≥99%) | 250U/μl×400μl |
| D7121-500KU | 超級核酸酶(≥99%) | 250U/μl×2ml |
| D7121-2000KU | 超級核酸酶(≥99%) | 250U/μl×2ml×4 |
| － | 說明書 | 1份 |
保存條件：
-20℃保存，三年有效。4℃保存，至少兩個月內(nèi)有效。
注意事項：
本產(chǎn)品不建議-80℃保存，凍融可能會降低本產(chǎn)品的酶活性。
Mg2+是超級核酸酶的關(guān)鍵催化輔助因子，反應(yīng)緩沖液含有1-2mM Mg2+對超級核酸酶的活性是必須的。
參照最適范圍和有效范圍表格，若使用的溶液較為特殊，如為高鹽溶液，或偏酸性、偏堿性，或含有較高濃度的去垢劑、變性劑等，應(yīng)適當增加超級核酸酶的用量或孵育時間。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
