產品簡介：改進的異硫氰酸胍/酚一步法（液體樣品專用 TRIzol LS 法）裂解細胞和滅活RNA 酶， 然后總 RNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜
質去除， 最后低鹽的 RNase free water 將純凈 RNA 從硅基質膜上洗脫。
產品特點如下：
1. 離心吸附柱內硅基質膜全部采用特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復性好。
2. 結合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好，純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點，不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程，RNA 可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。
3. 獨有的溶液 A 配方，可直接裂解全血，不需要先裂解去除紅細胞。
4. 多次漂洗去蛋白過程，提取 RNA 純度更高。
5. 有效的去除了 5S 在總 RNA 中含量，提高了純度。
運輸及保存 常溫運輸和保存，有效期一年。
儲存事項：
1. 因此運輸和儲存均在室溫下（15℃－25℃）進行。柱式血液 RNAout 溶液 A可以常溫運輸，收到后 4℃避光可長期保存，常溫保存 3 個月也不影響使用質量。
2. 避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發(fā)、氧化、PH 值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。
操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）
1. 提示：第一次使用前請先在漂洗液 RW 瓶中加入指定量無水乙醇!
2. 取 0.25 ml 血液（或血清，血漿，腦脊液等等)加入 0.75 ml 柱式血液 RNAout溶液 A，用加樣槍吹打液體樣品幾次以幫助裂解樣品中細胞。柱式血液RNAout 溶液 A 和液體樣品的終體積比總是 3：1。
3. 將樣品劇烈震蕩混勻后，在室溫靜置 5 分鐘以使核蛋白體完全分解。
4. 加 0.2 ml 氯仿，劇烈振蕩 15 秒并室溫靜置 2 分鐘。
5. 于 4℃ 13,000 rpm 離心 10 分鐘，樣品會分成三層：下層有機相，中間層和上層無色的水相，RNA 存在于水相中。水相層的容量大約為所加 溶液 A體積的 60%，把水相轉移到新管中，進行下一步操作。
6. 加入 0.5 倍體積無水乙醇，顛倒混勻（此時可能會出現沉淀）。得到的溶液和可能沉淀一起轉入吸附柱 RA 中（吸附柱套在收集管內）。
7. 室溫（以下步驟均為室溫）13,000 rpm 離心 30 秒，棄掉廢液，將吸附柱重新套回收集管。
8. 加 500 μl 柱式血液 RNAout 溶液 B，12,000 rpm 離心 30 秒，棄掉廢液。
9. 加入 500 μl 漂洗液 RW（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm 離心 15 秒，棄掉廢液。
10. 重復一遍步驟 8。
11. 將吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm 離心2分鐘，盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
12. 取出吸附柱 RA，放入一個 RNase free 離心管中，根據預期 RNA 產量在吸附膜的中間部位加 30-50μl RNase free water（事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好）， 室溫放置 2 分鐘，13,000 rpm 離心 1 分鐘。如果需要較多 RNA，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，離心 1 分鐘，,或者另外再加 30μl RNase free water，離心 1 分鐘，合并兩次洗脫液。
13. 如果需要 RNA 濃度較高，可以適當減少洗脫體積， 但是最小體積最好不少于 30μl，體積過小降低 RNA 洗脫效率，減少 RNA 產量。
注意事項
1. 第一次使用前請先在漂洗液 RW 瓶中加入指定量乙醇，加入后請及時打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!
2. 本試劑盒抑制 RNA 酶效果極佳，所有離心步驟如未加說明，均可在常溫進行。
3. 柱式血液 RNAout 溶液 A 和柱式血液 RNAout 溶液 B 中含有刺激性有害化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. 考慮到環(huán)保問題，本試劑盒不含有實驗室常用試劑氯仿，使用前需要自備氯仿。
5. 常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳和變性膠電泳均可以用來分析 RNA 的質量。好的 RNA 產物在電泳后應該可以看到明顯的二條優(yōu)勢核糖體 RNA 帶，分別為~5Kb（28S），~2Kb
（18S），條帶亮度比值約為 2：1。有時候也可以看到~0.1kb 和 0.3Kb(5S，tRNA)帶。但有時候根據不同的物種如某些植物組織可以看到 4，5 條帶也屬于正常現象，如果 RNA 未成熟的前體或者不均一核 RNA、小核 RNA 提取出來也可能看到介于 7Kb和 15Kb 之間的不連續(xù)的高分子量條帶。
6. 檢測 OD260/OD280 吸光度比值時，如需稀釋 RNA 樣品應該用 TE（PH 8)，如果用水稀釋后檢測，由于一般水離子強度和 PH 值低，會使 OD280 升高，從而使比值降低。
7. 加入柱式血液 RNAout 溶液 A 勻漿后，加氯仿前，樣品可在 –60℃-70℃ 保存一個月以上。
8. 若提取細菌 RNA，推薦 EASYspin 系列細菌 RNA 提取試劑盒。
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