環(huán)氧活化高流速 6B 瓊脂糖微球是將環(huán)氧基團(tuán)鍵合在瓊脂糖微球 6FF 上凍干形成的一種活性中間體，可直接偶聯(lián)配基制備分離介質(zhì)，用于生物大分子的純化分離。
1. 外觀
本品為白色球狀凝膠,無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見雜質(zhì)。
2. 理化指標(biāo)
| 項(xiàng) | 目 | 指標(biāo) |
| 配 | 基 | 環(huán)氧基 |
| 基 | 質(zhì) | 高流速 6%瓊脂糖微球 |
| 顆粒形狀及大小 | 球形50~160 μm | |
| 配基密度 | 20~40μmol 環(huán)氧基/ml 介質(zhì) | |
| 最高流速（25℃） | 300 cm/h* | |
| 耐壓 | 0.2 MPa | |
| pH 適用范圍** | 2~14 | |
|
化學(xué)穩(wěn)定性** | 以下溶液中穩(wěn)定： | |
*檢測(cè)條件： 層析柱 16mm×300mm*柱床高 15cm,25℃, 流動(dòng)相為 0.1mol/LNaCl
**是指偶聯(lián)配基后的分離介質(zhì)的性能3．運(yùn)輸
運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓，嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。
4. 貯存：
5. 保質(zhì)期：暫定 2 年。
6. 應(yīng)用
環(huán)氧活化瓊脂糖微球FF 是將環(huán)氧基團(tuán)鍵合在瓊脂糖微球 6FF 上凍干形成的一種活性中間體，可直接偶聯(lián)含氨基、巰基和羥基的配基制備分離介質(zhì)，用于生物大分子的純化分離。
下面簡(jiǎn)要介紹環(huán)氧活化瓊脂糖微球偶聯(lián)含氨基配基的使用過(guò)程。
6.1 干粉的溶脹
稱取一定量的環(huán)氧活化高流速瓊脂糖微球凍干粉，在蒸餾水中懸浮溶脹（1g 干粉約溶脹為 3～4ml 凝膠），放置大約 1 小時(shí)后抽濾，并用約 200ml（PH 7）去離子水洗滌干凈其中的添加劑，并在漏斗中抽干。
6.2 配基的偶聯(lián)
一般配基偶聯(lián)的過(guò)程如下：
（1） 偶聯(lián)溶劑：可用去離子水、碳酸鹽緩沖液和磷酸鹽緩沖液。不能用含氨基和其他含親核試劑的溶液。有時(shí)需要有機(jī)溶劑溶解配基，如用 50%二甲基甲酰胺和二氧六環(huán)等。
（2） 取一定量的配基溶解到偶聯(lián)用的緩沖溶液中，使其完全溶解，最低濃度為 200μmol
（3） 將溶脹的凝膠懸浮到含有配基的緩沖溶液中，在 20℃~45℃的水浴中搖蕩 16 小時(shí)。也可以用其他攪拌方法使配基偶聯(lián)，請(qǐng)勿用磁力攪拌。
（4） 反應(yīng)完全后，再洗滌掉緩沖液中的多余的配基。
（5） 殘余活性基團(tuán)的消除，將反應(yīng)完洗滌過(guò)的凝膠懸浮到 1mol/L 乙醇胺（PH 8）的溶液中，在 40℃~50℃最少反應(yīng) 4 小時(shí)或者室溫反應(yīng)過(guò)夜。
（6） 在反應(yīng)完后，用含有 0.5mol/LNaCl 的 0.1mol/L 醋酸緩沖液（PH 4.0）和含有0.5mol/LNaCl 的偶聯(lián)緩沖液（PH 8.3）交替洗滌，至少重復(fù)以上循環(huán)洗滌 3 次。
6.3 裝柱
⑴讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。
⑵根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉溶液，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液
⑶將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使 底端無(wú)氣泡。
⑷用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
⑸打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的 1.33 倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。用 2~3 倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
6.4 平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和 pH 不變。平衡緩沖液一般是根據(jù)需要純化的蛋白來(lái)決定用哪種緩沖液。
6.5 上樣
⑴樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。
⑵一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
⑶介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于介質(zhì)配基的親和作用、樣品的親和性質(zhì)、流動(dòng)相的 組成和溫度。
(4)再用緩沖液平衡到流出液電導(dǎo)和 pH 不變。
6.6 洗脫
洗脫液也要根據(jù)需要純化的蛋白決定。
6.7 再生
對(duì)于使用之后的凝膠，以 2~3 倍柱體積的 0.1mol/L Tris·HCl+0.5mol/L NaC（l PH=8.5）
6.8 在位清洗
根據(jù)偶聯(lián)的配基選擇在位清洗的方法，以洗去柱子污染物同時(shí)不傷害柱子為原則。對(duì)于一般的污染，用 0.1mol/L NaOH 進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間的清洗，對(duì)配基基本沒(méi)有的影響；當(dāng)嚴(yán)重污染后，可用 0.5mol/L NaOH 進(jìn)行短時(shí)間的清洗；對(duì)于介質(zhì)中含有其他試劑的，可用含有 8 mol/L 尿素和 6 mol/L 的鹽酸胍的溶液進(jìn)行在位清洗。若有失活蛋白或脂類物質(zhì)洗不干凈，可用非離子表面活性劑如 0.1% Triton 洗滌。
6.9 注意
