訂購貨號：DCRS-A
MagLive 死細胞去除試劑盒
MagLive Dead Cell Removal Kit
保存：室溫。（開封后可以 2-8°C 保存） 規格：10 Tests / 25 Tests
簡介：
MagLive 死細胞去除試劑盒通過負選擇的磁性分離方法去除細胞培養過程中的死細胞和細胞碎片。MagLive 可以去除死細胞、細胞碎片、游離的寡核苷酸。通過這樣的步驟后可以提高細胞培養的純度，改善數據分析的質量，并對后續下游的實驗結果產生積極的影響，對將來的分子生物學的細胞分析更為有效。MagLive 產品不含外源蛋白，如 Annexin-V（膜聯蛋白 V）。
MagLive 特點：
² 不含 Annexin-V
² 不含外源蛋白，不會污染
² 無菌溶液
² 一步去除死細胞、細胞碎片、游離寡核苷酸
² 不需要含鈣（Annexin-V 需要）的緩沖液
² 對于懸浮細胞尤其適用
² 和臺盼藍或 PI 死細胞檢測方法兼容
提供的實驗材料：
MagLive 死細胞去除溶液：10T (1 mL) / 25T (2.5 mL)
其他未提供的所需實驗材料：
1. 5ml 無菌培養管/試管
2. 15ml 無菌離心管
3. 離心機
4. 磁性分離器（磁力應足夠大，否則納米級磁珠不容易被分離）
5. 移液器及吸頭
6. 無菌 PBS
7. 臺盼藍/細胞計數器等細胞計數相關耗材
實驗步驟：
1. 收集不超過 5mL 的濃度為 1×105～1×106/mL 的懸浮細胞溶液至 5mL 的無菌聚苯乙烯培養管
/試管中并計數。
2. 對細胞懸浮液 300g 離心 5min。去除上清液，用 1mL 無菌 PBS 重懸。
注意：不同于 Annexin V 的細胞分離方法，本產品不需含 Ca2+緩沖液。
但我們建議對細胞懸液進行血清饑餓處理，因為血清會影響分離效果。而且培養基中游離的蛋白也會影響分離效果，因為游離的蛋白和死細胞會競爭與磁珠的結合。我們建議采用無蛋白培養基。
3. 對重懸后的溶液加入 0.1mL MagLive。使用移液器吸頭進行輕柔吹吸兩次，以使溶液完全混勻。室溫孵育 5min。
注意：磁性分離的時間不能太長，否則活細胞會沉降，反而降低活細胞率。
4. 將試管放置在磁性分離器環境中 15min。本溶液中的死細胞、細胞碎片、游離的寡核苷酸等會被磁珠捕獲并吸附至磁鐵一側。應使試管和磁鐵的距離越小越好。
說明：如果實驗室沒有磁性分離器，可使用更經濟的磁鐵代替。但其磁力應足夠分離納米級磁珠。可以先采用常見細胞預實驗，如 NIH3T3。
5. 保持試管不動。另取 1 支 15mL 無菌離心管。使用移液器吸頭輕柔的吸取細胞懸液（約 1mL） 轉移至新的 15mL 離心管中。注意不要吸取到磁珠層（參考注意事項 4）。
6. 吸取 9mL 無菌 PBS 緩沖液至 15mL 離心管。輕柔混勻，300g 離心 5min。去除上清液。
7. 使用細胞培養液將離心后的細胞進行重懸。即可以進行后續的實驗了。
以上實驗數據為經驗數據，亦可自行優化。以上過程應保持在無菌條件下進行。
常見問題：
1. 細胞非懸浮狀態而是成團狀態，是否可以使用 MagLive 死細胞去除試劑盒？
答：可以。需要先對成團細胞進行消化解離。推薦使用 Mildase 細胞消化液產品（訂購貨號：
HC0145）或 FCMase 細胞消化液（訂購貨號：HC0146）。
2. 對需要去除的懸浮溶液中細胞的濃度是否有要求？
答：有要求。如果細胞濃度過高會影響并降低死細胞的去除效率。因此，我們推薦細胞的濃度為 1×105～1×106/mL，最高不要超過 1×107/mL。
3. 磁性分離后溶液的顏色依然是棕色的而非無色透明是什么原因？
答：本試劑的原理是磁珠分離，但未結合目標死細胞的磁珠是不容易被磁吸的，所以一定時間內溶液顏色并不會完全無色。未吸附的磁珠后續會被清洗掉（實驗步驟 6）。
注意事項：
1. 如將 MagLive 放置在 4C 環境，應待平衡至室溫后再使用。且應在開蓋前漩渦或超聲混勻。
2. 建議先采用常見細胞預實驗，如 NIH3T3，一是熟悉該實驗過程，二是驗證實驗所需其他材料可以滿足本實驗要求，如磁性分離器的磁力足夠大。
3. 如果活細胞率太低，僅使用 MagLive 可能不能達到一次去除所有細胞碎片或死細胞的目的。此情況下，建議結合使用其他方法，或多次操作，或適當增加磁珠的用量。
4. 對于較難存活的細胞，如不能耐受 PBS 的環境，建議采用其他方法。
5. 結合死細胞等的磁珠被磁性分離后肉眼是看不到細胞層的，所以在吸取活細胞懸液的時候要小心，不能攪動到磁性一側吸附的細胞層。
6. 未吸附到死細胞等的磁珠是不容易被磁性分離的，所以在后期細胞的洗滌過程中一定要把游離的磁珠洗去（實驗步驟 6）。
7. 磁性分離器需要具備分離納米級磁珠的磁力。每次處理的溶液量不宜過多，當試管直徑較大時，部分溶液不容易被分離。會影響分離效果。應使試管離磁性分離器越近越好。
8. 細胞懸浮緩沖液不能含有蛋白。否則會降低磁珠結合死細胞等的能力，因為游離的蛋白和死細胞會競爭與磁珠的結合。
相關產品：
| 貨號 | 名稱 | 規格 | 特點 |
| HC0058 | PBS，1×，pH7.2-7.4，杜貝 爾科磷酸鹽緩沖液 | 500ml | 細胞培養級，不含鈣鎂 |
| HC0736 | 10×PBS緩 沖 液 （ pH 7.2-7.4），無菌溶液，D-PBS | 500ml | 細胞培養級，不含鈣鎂 |
| HC0149 | PBS + 2% FBS（胎牛血清） | 500ml | 細胞沖洗 |
| HC0153 | 流式用鞘液，8x | 2.5L | 流式平臺專用鞘液，8 倍無菌濃縮液，節約運 輸成本 |
| HC0145 | Mildase 細胞消化液 | 100ml | 溫和無毒，替代胰酶對貼壁細胞的消化，不含 動物酶，無需滅活 |
| HC0146 | FCMase 細胞消化液 | 100ml | 流式細胞術、細胞計數等用細胞消化液，比 Mildase 的消化能力強，可以用于替代胰酶對組織等進行溫和消化。 |
注意：以上產品僅供科學研究，不用于臨床診斷或藥物開發。
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