產品簡介：
Acridine Orange, AO屬于三環雜芳香燃料，可以標記DNA、RNA，屬于異染性熒光染料。該染料具有膜通透性，能透過細胞膜，使核DNA和RNA染色。因此AO常用于細胞內DNA和RNA進行檢測。AO與核酸結合方式主要有：1、插入性結合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，這種結合方式主要為AO與DNA的結合，其熒光發射峰為530nm，激發后呈綠色熒光；2、靜電吸引，帶正電荷的AO與單鏈核酸的磷酸根(帶負電荷)產生靜電間的吸引結合，這種結合方式主要為AO與RNA的結合，其熒光發射峰為640nm，激發后呈紅色熒光，少量結合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，吖啶橙嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色，與DNA單鏈或RNA結合時發桔黃色或橙紅色熒光。
AO染色試劑盒(Acridine Orange Detection Kit)主要由AO Stain、AO Stain Buffer組成，常用于細胞凋亡的檢測。染色后在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細胞膜，使細胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細胞中，因染色質固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。AO使其染上致密濃染的黃綠色熒光或黃綠色碎片顆粒；而壞死細胞黃熒光減弱甚至消失。AO染色常與EB染色合用雙染， EB只染死細胞使之產生桔黃色熒光，由此可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。
產品組成：
| 編號 名稱 | DA0037 100T | Storage |
| 試劑(A): AO Stain | 500μl | 4℃ 避光 |
| 試劑(B): AO Stain Buffer(10×) | 10ml | 4℃ |
| 使用說明書 | 1份 | |
自備材料：
熒光顯微鏡
低速離心機
PBS
細胞計數板
載玻片、蓋玻片
操作步驟(僅供參考)：
(一) AO單獨染色
收集細胞(采用流式細胞儀檢測時，應先固定細胞)，用AO Stain Buffer(1×)清洗細胞1次，加入適量的AO Stain Buffer(1×)重懸細胞，計數并調節細胞濃度至106/ml。
取適量的細胞懸液和AO Stain，按照細胞懸液:AO Stain=19:1的比例混合，輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下觀察，一般取95μl細胞懸液和5μlAO Stain混合即可。
室溫避光染色15min，滴加于載玻片上并加蓋玻片或上 流式細胞儀分析。
熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長488nm，阻斷濾光片波長515nm)，計數并拍照。
染色結果
| 正常細胞 | 細胞被均勻染成黃綠色熒光 |
| 凋亡細胞 | 染色質濃縮，細胞核碎裂成點狀，被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒 |
(二) AO/EB雙染色
收集細胞，用AO Stain Buffer(1×)清洗細胞1次，加入適量的AO Stain Buffer(1×)重懸細胞，計數并調節細胞濃度至106/ml。
取適量的細胞懸液和AO Stain，按照細胞懸液:AO Stain=19:1的比例混合，并加入適量EB染色液，輕輕混勻。如果采用熒光顯微鏡下觀察，一般取95μl細胞懸液和5μl AO Stain混合即可。
室溫避光染色15min，滴加于載玻片上并加蓋玻片
熒光顯微鏡濾光片515nm觀察，計數并拍照。
染色結果
| 正常細胞 | 均勻染成綠色熒光 |
| 壞死細胞 | 細胞桔黃色熒光 |
| 凋亡細胞 | 染色質濃縮，細胞核碎裂，被染成大小不一、致密濃染的黃綠色顆粒或見胞質芽狀突起。 |
計算細胞凋亡率和死亡率:
注意事項：
AO染色常與EB染色合用，可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。
如有低溫離心機進行離心效果更佳，同時應注意減少試劑暴露于強光下的時間。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
