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副溶血性弧菌PCR試劑盒

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產品及特點 副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus）是一種海洋細菌，主要來源于魚、蝦、蟹、貝類和海藻等海產品。進食含有該菌的食物可致食物中毒，也稱嗜鹽菌食物中毒。潛伏期自1小時至4天不等，多數為10小時左右，起病急驟，常有腹痛、腹瀉、嘔吐、失水、畏寒及發熱，腹痛多呈陳發性絞痛，常位于上腹部、臍周或回盲部，腹瀉每日3～20余次不等，大便性狀多樣，多數為黃水樣或黃糊便，約2%～16%呈典型的血水或洗肉水樣便，部分病人的糞便可為膿血樣或粘液血樣，對人體健康具有巨大危害，因此快速檢測具有重要意義。本試劑盒根據熒光定量PCR原理開發，它具有下列特點：
  1. 即開即用，用戶只需要提供細菌DNA模板。
  2. 引物經過精心優化，專一性強，只擴增副溶血性弧菌。
  3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
  4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
  5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次。
  6. 本產品只能用于科研。
  
規格及成分
成  份 編號 十孔盒包裝
PCR MagicMix 3.0 90805 1 mL（亮黃蓋）
超純水 100935 1 mL（藍色）
副溶血性弧菌PCR引物混合液 13-14870yw 100 μL（白蓋）
副溶血性弧菌PCR陽性對照 13-14870pc 100 μL（黃蓋）
天凈沙DNA釋放劑試用裝 130982 50次（試用裝）
使用手冊 13-14870sc 1份
 
運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。  
自備試劑 樣品DNA。  
使用方法 一、樣品DNA的制備
  1. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
  2. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數細菌DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的細菌DNAout或柱式細菌DNAout。本試劑盒免費贈送50次免DNA提取的天凈沙DNA釋放劑，本產品的裂解液可以直接作為PCR模板，省略了DNA提取步驟。其使用手冊可聯系客服發送。
二、設置PCR反應（40 μL體系）
  1. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：
成分 N+2個
樣品管		 PCR陰性對照 PCR陽性對照
PCR MagicMix 3.0 各20 μL 20 μL 20 μL
副溶血性弧菌 PCR引物混合液 各2 μL 2 μL 2 μL
N+2個樣品DNA模板 各18 μL - -
樣品制備陰性對照 - 18 μL -
樣品制備陽性對照 - - 18 μL
  1. 按下表設置PCR反應：
過程 溫度 時間
預變性 94℃ 5 min
PCR反應
（35個循環）		 94℃ 20 sec
58℃ 20 sec
72℃ 30 sec
最后延伸 72℃ 10 min
三、電泳檢測
  1. 取10-20 μL PCR產物。電泳檢測PCR產物。本產品提供的PCR Mix在擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加loading buffer。預期的PCR產物長度為208bp。陽性對照必須有此條帶出現，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產物的樣品，可以稀釋10倍后重復PCR擴增以排除PCR抑制劑的感染。
  
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