基本信息
啟動子:araBAD
復制子:pSC101
終止子:λ tL3 terminator
原核抗性:Amp
克隆菌株:DH5a
培養條件:30度
表達宿主:大腸桿菌
誘導方式:阿拉伯糖
載體宿主：大腸桿菌
載體用途：基因敲除
基因類型：Red
原核抗性：Amp
質粒簡介
pKD46質粒是目前應用最廣泛的Red同源重組質粒，該質粒含有受阿拉伯糖啟動子調控的exo、bet、gam基因，其復制子為低拷貝溫敏型復制子，便于質粒的消除。
與同源重組基因敲除相關的3個酶：
1、Exo蛋白：Exo蛋白是一種核酸外切酶，單亞基的分子量為24 kD，Exo蛋白的活性形式是一種環狀三聚物分子，中間有一中空的通道，通道的一端可容納雙鏈DNA分子，另一端只可容納單鏈DNA。Exo蛋白可結合在雙鏈DNA的末端，從DNA雙鏈的5’端向3’端降解DNA，使DNA分子形成3’粘性末端。
2、Beta蛋白：Beta蛋白在Red同源重組中起著決定性作用，具有介導互補單鏈DNA退火的功能，是一種退火蛋白，單亞基的分子量為25.8 kD。在溶液中，Beta蛋白自發地形成環狀結構，緊緊地結合在單鏈DNA的3’突出端，防止DNA被單鏈核酸酶降解，并介導互補單鏈DNA的退火。雙鏈DNA退火完成后，Beta蛋白從DNA雙鏈上解離下來。
3、Gam蛋白：Gam蛋白為16kD的多肽分子，可與RecBCD核酸外切酶結合，抑制其對外源DNA的降解作用，防止外源DNA 進入細胞后被宿主降解。
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