Bst2.0 HNB變色擴增試劑盒

產品編號：A3802
產品類別：核酸擴增/純化
存儲條件：-20℃
保質期：六個月

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在核酸分子的恒溫擴增過程中，無論采用LAMP、HDA、RCA、CPA、SMAP等擴增技術，這種高速度的擴增特性，均不可避免的引起假陽性擴增。這種假陽性的擴增情況在LAMP擴增中表現尤為明顯，由于LAMP擴增用到很高濃度的引物，因此難免保證有少量錯配和引物Dimer，這些輕微的污染都會導致在LAMP高速擴增中造成假陽性。HaiGene優化的反應緩沖液，配合獨有的顯色技術和陰性控制技術建立的預混恒溫mix系列產品，可高靈敏度、高特異性的用于LAMP HNB變色、LAMP紅黃變色、LAMP OG變色、 LAMP 濁度分析、LAMP SYBR Green熒光檢測、HDA熒光檢測、RCA熒光檢測、CPA熒光檢測、SMAP熒光檢測的擴增反應。在LAMP擴增實驗中，與其它公司提供的 DNA/RNA LAMP MasterMix 或 LAMP Mix相比，得益于 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶的出色性能， Bst 4.0 IsoAmp Red MasterMix具有更快的擴增速度和雜質耐受性。
Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶對dUTP底物的超強識別能力，擴增反應所需的核苷酸底物dTTP可被dUTP完全取代，因此擴增產物均包含dUTP，在配合熱敏UDG的情況下，氣溶膠污染物，將會在起始反應階段被徹底清除。而后續熱敏UDG在65℃條件下3min內，完全不可逆失活；從而既能消除污染物，又能保證核酸正常擴增。因此，應用該試劑能大大降低LAMP反應中由于氣溶膠污染造成的假陽性信號。

使用特征

	Bst 4.0 MasterMix
特點	單組分預混
擴增用酶	Bst3.0+ThermoStable V
DNA模板	★★★★★
RNA模板	★★★★★
擴增速度	★★★★★
反應溫度	60-68℃
雜質耐受性	★★★★★

以2019-nCov核酸擴增為例三種方法的性能比較

	紅黃變色可視化（Cat.No.:A3824-01）	橙綠變色可視化（Cat.No.:A3824-02）	熒光法（Cat.No.:A3824-03）
試劑信息	靶標均為N基因，凍干Assay均相同；搭配不同Buffer實現不同的顯色。
檢測方法	肉眼觀測	肉眼觀測	SYBR Green熒光
檢測設備	水浴鍋、金屬浴、PCR儀	水浴鍋、金屬浴、PCR儀	定量PCR或恒溫熒光儀
陽性判讀方式	黃色為陽性	綠色為陽性	有擴增曲線為陽性
反應溫度	60-65℃
反應時間	30min	20min	15-18min
靈敏度（100%檢出）	10 copies/test	10 copies/test	10 copies/test
單copy檢出率	10-30%	30-50%	30-50%
假陽性比例	<1%	<1%	<1%
抗雜質能力	+++	+++++	+++++
操作通量	可高通量檢測	不適宜大量樣本	30-50%

實例展示

1、A3824-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）
以2019-nCoV 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、10⁴和10⁶Copy，NTC為ddH₂O為模板。上圖為加樣結束反應起始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

2、A3824-02 搭配 OG 橙綠變色反應管（A3821）（肉眼觀察）
以2019-nCoV 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、10⁴和10⁶Copy，NTC為ddH₂O為模板。上圖為加樣結束反應起始前，下圖為 65 度反應 20min 后。

3、A3824-03 用于熒光檢測（便攜式恒溫檢測儀）
以2019-nCoV 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、10⁴和10⁶Copy，NTC為ddH₂O為模板。上圖為加樣結束反應起始前，下圖為 65 度反應 26min 后。

4、A3802 用于HNB變色擴增反應
采用環引物對7個樣本（HHV-6 DNA核酸模板進行恒溫HNB變色檢測反應），NTC為不加模板的對照，產物以HNB顯色如下圖。

5、首先使用含dUTP的Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix擴增獲得三種基因產物（AFSV P72,Covid-19 N Gene-1，Covid-19 N Gene-2），然后以10⁵拷貝的含U產物作為模板，分別用Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix（with UDG）和Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix 進行擴增，反應結束后統計兩組之間的Ct，結果為：UDG組在30min內幾乎不起峰，無信號；未加UDG組均在4min之前起峰，表明該Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix（with UDG）具有良好的去除殘留模板的能力。

關于LAMP核酸擴增的技術專利與商標：LAMP核酸擴增技術專利由日本榮研化學株式會社所擁有（專利號CN1420928A/CN1222614C）。除此外，LAMP商標也隸屬日本榮研化學株式會社。恒溫擴增原料用酶與預混Mix系列產品，可用于LAMP擴增反應，但并不僅限于LAMP擴增，還可以進行RCA (Rolling Circle Amplification)、HDA(Helicase Dependent Amplification)、 SMAP（Smart Amplification Process）、CPA(Crossing Priming Amplification)等恒溫擴增方法。