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pCMV6-AC-FC-S質粒載體

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 基本信息

啟動子:CMV
復制子:pUC
克隆菌株:DH5a
培養條件:37度
5'測序引物:CMV-F
質粒屬性
載體宿主:哺乳細胞
基因種屬:空載體
基因類型:ORF
原核抗性:Amp
質粒簡介
pCMV6-AC-FC-S,如需質粒圖譜序列,請向客服索取
親愛的科研工作者,感謝您信任雅吉生物,我們致力于為大家分享質優價適的質粒,受各種因素影響,我們只保證質粒的關鍵序列測序正確,不能保證實驗效果。請您收到質粒后請務必先轉化,再挑取單菌落擴增,不要直接使用。如果您需要即用的大包裝質粒或病毒顆粒,可委托我們制備,性價比更高。
一、擴增流程
收到產品后,請先根據產品管壁標簽來判斷產品形式,并在擴增前準確查找該質粒菌株的抗性、感受態和培養溫度。
1、質粒干粉(常溫運輸,存于-20度,90天保質期,請務必轉化挑單克隆培養,不要直接使用和測序)
①收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl ddH2O去離子水溶解質粒;
②取1支100μl 感受態于冰上解凍10min,加入2μl質粒,再冰浴30min后,42℃熱激60s,不要攪動,再冰浴2min;(從第二步開始均要在超凈工作臺中無菌操作)
③加入900μl無抗的LB液體培養基,180rpm震蕩37℃培養45min;
④6000rpm離心5min,僅留100μl上清液重懸細菌沉淀,并涂布至目標質粒抗性的LB平板上;(可使用本平臺的平板涂布專用玻璃珠進行涂布,可以比傳統涂布方法獲得更多轉化子)
⑤將平板正向培養1h,再倒置37℃培養14h。如果要求是30度則培養20h;
(菌落過多則將質粒稀釋后再轉化。沒有菌落則加入10μl質粒轉化。另不要直接轉表達感受態,要先轉克隆感受態,重提質粒后再導入表達感受態)
⑥挑取單菌落至LB液體培養基中,加入對應抗生素,220rpm震蕩培養14h,根據實驗需要和質粒提取試劑盒說明書提取質粒。

 

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