BL21 感受態(tài)細(xì)胞
BL21 Chemically Competent Cell
保存條件： -80℃
產(chǎn)品規(guī)格:
BL21
10×100μl
pUC19（control vector）
10pg/μl；10μl
E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)
BL21 是最早開(kāi)發(fā)的用于原核表達(dá)的菌株，BL21（DE3）、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核
表達(dá)菌株均來(lái)源于 BL21 菌株。該菌株主要用于非毒性蛋白的表達(dá)，不含 T7 RNA 聚合酶，所以不能用
于由 T7 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的蛋白表達(dá)(如：pET 系列)；但含有大腸桿菌 RNA 聚合酶，可以用于 tac 或 trc 等
使用大腸桿菌 RNA 聚合酶的原核系統(tǒng)的表達(dá)（如：pGEX，pMAL 質(zhì)粒）。 BL21 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工
藝制作，經(jīng) pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá) 107cfu/μg。
1. 取 100μl 冰上融化的 BL21 感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置 25 分鐘。
2. 42℃水浴熱激 90 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入 700μl 不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT 或 LB），混勻后 37℃，200rpm 復(fù)蘇 60 分
鐘。
4. 5000rpm 離心一分鐘收菌，留取 100μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 2YT
基 因 型
簡(jiǎn) 要 說(shuō) 明
操 作 說(shuō) 明或 LB 培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。
1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
4. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG 濃度可選（0.1-2mM 均可）。
5. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG 濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。
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