H9細胞完全培養基

貨號：H9Med-001

規格：500mL

儲存條件：基礎培養基2 ~ 8℃，添加劑-80 ~ -20℃；混勻后2 ~ 8℃，2周內使用完畢。

產品簡介：

H9細胞培養基是雅吉生物開發出的一種適用于無飼養層培養、化學成分明確、并且不含動物源蛋白的人多潛能干細胞（hESC/hiPSC）完全培養基。H9細胞培養基是在James Thomson實驗室開發的Essential 8培養基的基礎上，改良研發出的最新型多潛能干細胞完全培養基。hESC/hiPSC在H9細胞培養基中可以快速增殖，而分化的細胞則無法在該培養基中生長，從而選擇性擴增并獲得高純度多潛能干細胞。

產品內容：

試劑準備：

H9細胞完全培養基：將H9細胞添加劑加入H9細胞基礎培養基中形成H9細胞完全培養基（推薦每2mL添加劑與50mL基礎培養基混合）。

H9細胞完全培養基可在2-8℃穩定儲存2-3周。

疑難解答：

•是否還需要往H9細胞完全培養基中補充或添加成分？

不需要。H9細胞培養基中各個成分的質量和濃度都經過了最優化實驗，完全支持人ESC/iPSC的長期培養，您無需再自行添加。

•培養基中有沉淀狀物質是否是質量問題？

添加劑在解凍過程中，若有少量沉淀析出，屬于正常現象，不影響使用，請充分混勻后與基礎培養基混合。但添加劑不能在37℃解凍，否則會析出大量沉淀，影響培養基的效價。如果培養基中出現大量沉淀，請不要使用。

•是否能在37 ℃反復水浴H9細胞完全培養基？

不能。頻繁地在4℃和37℃之間轉換會導致H9細胞完全培養基中含有的因子失活，H9細胞完全培養基在使用前平衡至室溫即可。

• H9細胞在傳代后不貼壁怎么解決？

造成H9傳代后不貼壁的最可能的原因：

① 細胞消化時間不合適；②消化后吹打次數不合適，使得完成傳代后細胞集落過大或過小。

• H9分化怎么處理？

① 細胞在剛復蘇或傳代時，小的細胞團不呈現標準的克隆形態，培養幾天或傳代后可恢復。②如果H9分化的表現為干細胞克隆形態良好，克隆周邊出現散在的分化細胞，可通過高比例傳代（≥1:10），使得分化細胞的密度減少，低密度的分化細胞可被H9培養體系篩選去除，如未完全去除，可用細胞刮或巴斯德管刮除。

② 如果H9分化的表現為克隆內部松散，邊緣不平滑，在分化比例小或分化不嚴重的情況下，可通過連續傳代2 ~ 3次恢復，如果分化嚴重，建議棄除。

• 細胞復蘇率低是什么原因？

細胞復蘇需使用H9細胞復蘇培養基，可大大提高細胞的復蘇效率。復蘇過程中，轉移細胞、吹打混勻和重懸細胞時，吹打力度要輕柔，并盡量減少吹打次數，細胞接種后，即刻在顯微鏡下觀察細胞團塊的大小，4 ~ 10個細胞的團塊為最佳。如果吹打力度過大或次數過多，

導致細胞分散成單細胞，細胞復蘇率將偏低。

H9細胞鋪底工作液

貨號：H9Med-CA006

規格：100mL

儲存條件：基礎培養基2 ~ 8℃，添加劑-20℃；2 ~ 8℃解凍，禁止反復凍融。

產品簡介：

H9細胞鋪底工作液是使用基質膠配制好的即用型工作液，可以為人胚胎干細胞（ES）無飼養層培養（feeder-free culure）提供理想的底物支持。與H9細胞完全培養基聯合使用，可以穩定維持人ES在體外培養的多潛能性、快速增殖能力和正常的核型。

產品內容：

H9細胞鋪底工作液-添加劑分裝：

1. 提前一天在4℃冰箱中解凍H9細胞鋪底工作液-添加劑，

2. 提前準備無菌干燥的移液管或槍頭，EP管置于-20℃冰箱預冷，

3. 將化凍的H9細胞鋪底工作液-添加劑，置于冰上放入生物安全柜，

4. 用預冷的移液管或槍頭將H9細胞鋪底工作液-添加劑按1mL/支分裝到EP管中，并放入-20℃保存。

工作液配制：

1. 取分裝好的1mL H9細胞鋪底工作液-添加劑放入4℃冰箱解凍，

2. 30min后，將解凍的H9細胞鋪底工作液-添加劑加入到9mL基礎液中，并充分混勻，

3. H9細胞鋪底工作液推薦使用量：

4. H9細胞鋪底工作液完全覆蓋瓶/皿底，置于37℃培養箱2h或過夜。

5. 細胞復蘇時，在鋪瓶/皿前，需將鋪底工作液吸出。

 Y27632說明書

貨號：H9Med-CA005

規格：1mg（10mM）

儲存條件：-20ºC

產品描述:

獨家引進，可以阻止人胚胎干細胞（hES）因分離誘導的細胞凋亡，在不影響hES的自我更新或者多潛能特性的前提下改善分離的hES細胞的存活率和克隆效率。

建議將該溶液1000倍稀釋（10μM濃度）加入H9細胞完全培養基，混合均勻。

建議分裝后-20ºC避光保存，避免反復凍存，至少可存放6個月。

注意事項：

♦本產品為化學試劑對人體可能有害，請做好安全防護工作，避免直接接觸皮膚。

♦本產品僅用于科研用途，禁止用于人身上。

H9細胞消化液

貨號：H9Med-CA003         

規格： 500mL           

儲存條件：2 ~ 8 ℃

產品簡介：

H9細胞消化液可以應用于非飼養層依賴的H9傳代，該工作液屬于非酶類溫和消化液，對細胞損傷小且消化時間適中便于操作，是一種已被普遍使用的消化液，可與H9培養基搭配使用。

操作說明：

1. 將H9完全培養基取出并平衡至室溫，取出包被過Matrix的培養皿/瓶，吸去包被液并加入適量完全培養基，置于5% CO₂的37℃恒溫細胞培養箱中。

2. 吸走待傳代細胞培養皿/瓶中的iPS完全培養基，并且加入無鈣鎂的PBS溶液洗一次。

3. 加入0.5mM EDTA傳代工作液使之完全覆蓋皿/瓶底。

4. 室溫放置5 ~ 8 min或37℃恒溫細胞培養箱中孵育3 ~ 5 min，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底，克隆內部大部分細胞間出現間隙但尚未相互分離，肉眼觀察到細胞集落變得不透明且發白，表明細胞消化時間理想。

5. 吸去傳代工作液，即刻加入新鮮的H9完全培養基，用移液器扇形吹打培養皿/瓶底，使皿/瓶底貼附的干細胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻。

  注：吹吸的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數總共不超過10次為宜。吹打過度導致大量單細胞出現是造成細胞分化或死亡的重要原因。

  注：如有少量細胞無法從皿底脫落，屬于正常現象。如有大量細胞無法從皿底脫落，需延長消化時間。

6. 顯微鏡下觀察細胞呈4 ~ 20個細胞大小的團塊，水平十字搖勻。

7. 將細胞置于5% CO₂的37℃恒溫培養箱培養。

8. 每天換液直至達到可以傳代的標準。