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單寧含量檢測試劑盒

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     意:正式測定前取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

單寧是一類廣泛存在于植物體內的多元酚化合物,又稱植物多酚。具有獨特的化學性質和多種生理活性,如能與蛋白質、生物堿、多糖結合;能與多種金屬離子發生絡合或靜電作用;具有止血、抑制微生物、抗過敏、抗突變、抗腫瘤、抗衰老等生理活性。

 

測定原理:

單寧在堿性環境下與磷鉬酸反應,生成藍色化合物,在760nm處有最大吸收峰。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計、水浴、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

試劑一:液體10 mL× 1瓶,4保存;

試劑液體8 mL × 1瓶,4保存;

 

單寧的提取: 

按照組織質量(g:蒸餾水體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水),充分勻漿后轉移到EP管中,80℃水浴提取30min 8000 g25℃離心10 min,取上清液待測。

 

測定步驟:

1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至760nm,蒸餾水調零;試劑一和試劑二37預熱10min以上;

2、操作表:

試劑名稱(µL

對照管

測定管

樣本

 

25

蒸餾水

675

650

試劑一

175

175

混勻,室溫靜置5min

試劑二

150

150

混勻,室溫靜置30min760nm處讀取吸光值AΔA=A測定-A對照,對照管只要做一管。

 

單寧含量計算:

1、標準條件下測定的回歸方程為y = 1.6418x +0.0134x為標準品濃度(mg/mL)yΔA(A測定-A對照)

2、按樣本鮮重計算:

單寧含量mg /g鮮重)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷W×V1÷V2=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W

3、按樣本蛋白濃度計算:

單寧含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr

V1:加入樣本體積,0.025mLV2:加入提取液體積,1mL Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mLW:樣本鮮重,g

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