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植物銨態氮試劑盒

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植物銨態氮試劑盒說明書

                                                        分光光度法50/48

 

    意: 正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

氮素是構成生物體的一種必需元素,自然界中的氮素循環包括許多轉化作用。空氣中的氮氣被固氮微生物及植物與微生物的共生體固定成氨態氮,經過硝化微生物的作用轉化成硝態氮,后者被植物或微生物同化成有機氮化物,植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。

 

測定原理

α-氨基酸與水合茚三酮溶液一起加熱,經氧化脫氨變成相應的α-酮酸,酮酸進一步脫羧變成醛,水合茚三酮則被還原,在弱酸環境中,還原型茚三酮,氨和另一分子水合茚三酮反應, 縮合生成藍紫色物質,在580nm處有特征吸收峰。

 

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、常溫離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

 

試劑組成和配制

提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:粉劑×1支,4℃避光保存。臨用前加0.5mL蒸餾水充分溶解。

試劑三:液體25mL×1瓶,4℃保存。

 

樣本處理

按照質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,室溫勻漿后于25℃,12000g離心10min,取上清待測。

 

測定操作表

 

空白管

測定管

樣本(μL

 

200

蒸餾水(μL

200

 

試劑一(μL

300

300

試劑二(μL

10

10

充分混勻,沸水浴5min后自然冷卻10min

試劑三(μL

500

500

充分混勻,于1mL玻璃比色皿,蒸餾水調零,測定580nm處吸光值A,分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管

注意:空白管只需測定一次。

 

計算公式

 

標準曲線:y=0.1535x-0.0279R2=0.999NH4+N含量(μg/g 鮮重)=A+0.0279÷ 0.1535×V反總÷W×V÷V樣總)

                = 32.9×A+0.0279÷W

V反總:反應總體積,1.01mLV:反應體系中加入樣本體積,0.2mLV樣總:加入提取液體積,1mLW:樣本質量,g

 

注意事項

1. 提取好的待測液盡快測定,低溫保存不得超過24小時。

2. 沸水浴時間不宜過長,否則會對測定結果有影響。

3. 顯色后20min內完成測定。

4. 最低檢出限為18μg/g

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