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類胡蘿卜素(Carotenoid)檢測試劑盒(微板法)

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   意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定

測定意義:

類胡蘿卜素是一種脂溶性且具有營養特性的化合物,給植物和動物提供天然色素,是重要的抗氧化劑,并有能力轉換為必需維生素。類胡蘿卜素可預防細胞,組織和基因損毀,增強身體免疫系統,抵御感染,減少癌癥風險,保護心臟。

原理:

樣品通過混合有機溶劑萃取,類胡蘿卜素與非類胡蘿卜素成分分離,在440nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器:

天平、烘箱,100目篩、三角瓶或燒杯、漏斗,紗布、玻璃試管、可見分光光度計/酶標儀、丙酮

試劑組成和配制:

試劑一:液體2L4℃保存。

試劑二:丙酮(自備)1L4℃保存。

提取液:臨用前可按照試劑一(V):試劑二(V)= 2:1混勻,封口膜封緊,防止揮發,配置好的提取液4℃保存。

樣本處理:

組織樣品:60℃烘干粉碎,過 100 目篩,稱約 0.2g 于玻璃試管中,加 6mL 提取液,浸提 20min,提取液過濾至燒杯或三角瓶中,反復提取至殘渣無色,合并濾液定容至 50mL 待測。
測定操作表:

 

空白管

測定管

樣本(μL)

 

1000

提取液(μL)

1000

 

于微量石英比色皿/96 孔板,迅速測定440nm處吸光值A,分別記為A空白管和A測定管,△A=A測定管-A空白管

 

注意:空白管只需測定一次。

計算公式

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

類胡蘿卜素含量(μg/g)= △A×V 樣總÷(ε×d)÷W×1000

= 20×△A÷W

V 樣總:提取液總體積,50mL;ε:類胡蘿卜素經驗吸光系數,2500;d:比色皿光徑,1cm;W:樣本質量,g

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

類胡蘿卜素含量(μg/g)= △A×V 樣總÷(ε×d)÷W×1000

= 40×△A÷W

V 樣總:提取液總體積,50mL;ε:類胡蘿卜素經驗吸光系數,2500;d:96 孔板光徑,0.5cm;W:樣本質量,g

注意事項

1. 提取液易揮發,有毒性,操作時做好防護措施。

2. 測定必須能迅速,防止揮發造成誤差

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