產品簡介:
DB3.1 大腸桿菌菌株基因組中含有 gyrA462 基因,賦予其對 ccdB 毒性基因的抗性,特別適用于構 建或擴繁含有 ccdB 基因的質粒載體(例 GATEWAY System vector) ,此菌株具有鏈霉素抗性。DB3.1 感受態細胞經特殊工藝制作,經 pUC19 檢測轉化效率>108 cfu/μg DNA。
操作說明:
1、DB3.1 感受態細胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰 中),加入目的 DNA 并用指尖輕輕撥打管底混勻(避免用槍吸打),冰上靜置 25 分鐘。
2、42℃水浴熱激 45 秒,迅速放回冰上并靜置 2 分鐘,晃動會降低轉化效率。
3、向離心管中加入 700μl 不含抗生素的 2YT 或 LB 無菌培養基,混勻后 37℃,200 rpm 復蘇 60 分鐘。
4、5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB 培養基上。
5、將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養。
注意事項:
1、感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中 8 分鐘內加入目標 DNA,不可在冰中放置時間過長,長 時間存放會降低轉化效率。
2、混入目的 DNA 時應輕柔操作。
3、轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。
儲存條件: -80℃
用途: 克隆感受態細胞