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牛痘病毒-拓撲異構酶(Topoisomerase I )

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Topoisomerase I 來源于牛痘病毒(vaccinia virus),通過基因重組方案制備純化。其能解旋DNA的超螺旋結構,除此外其能識別并切割雙鏈DNA末端 [5’C(T)CCTT↓],并且與DNA形成共價連接形成穩定復合物。該共價復合物遇到DNA的5’-OH基團后,重新連接形成完整DNA鏈。因此,使用Topoisomerase I 酶可作為DNA的連接有效工具。其可用于DNA的載體連接、缺刻修復、接頭連接等實驗。

組分

組分名稱 數量
vaccinia Topoisomerase I (20 U/μl) 25 μl/250 μl
10×vaccinia TOPOI Buffer 1 ml

應用

  • DNA-載體連接
  • 缺刻修復
  • 接頭連接

活性定義

1單位指在37℃條件下,1h內使1μg超螺旋pUC19 DNA解旋所需要的酶量。

儲存

-20℃可保存3年。

使用注意事項

(1)1×vaccinia TOPOI Buffer:50mM Tris-acetate (pH 7.5), 100mM NaCl, 2.5mM MgCl2
(2)該酶的最佳反應溫度為37℃。80℃ 20min可使該酶失活。
(3)該酶切割偶聯試驗時,識別位點[5’C(T)CCTT↓]的3’端堿基數量影響偶聯效率。
(4)共價復合物進行DNA分子連接時,底物5’-端需要保留-OH基團。
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