該Topoisomerase I 來源于牛痘病毒(vaccinia virus),通過基因重組方案制備純化。其能解旋DNA的超螺旋結構,除此外其能識別并切割雙鏈DNA末端 [5’C(T)CCTT↓],并且與DNA形成共價連接形成穩定復合物。該共價復合物遇到DNA的5’-OH基團后,重新連接形成完整DNA鏈。因此,使用Topoisomerase I 酶可作為DNA的連接有效工具。其可用于DNA的載體連接、缺刻修復、接頭連接等實驗。 | ||||||||
組分 | ||||||||
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應用 | ||||||||
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活性定義 | ||||||||
1單位指在37℃條件下,1h內使1μg超螺旋pUC19 DNA解旋所需要的酶量。 | ||||||||
儲存 | ||||||||
-20℃可保存3年。 | ||||||||
使用注意事項 | ||||||||
(1)1×vaccinia TOPOI Buffer:50mM Tris-acetate (pH 7.5), 100mM NaCl, 2.5mM MgCl2。 (2)該酶的最佳反應溫度為37℃。80℃ 20min可使該酶失活。 (3)該酶切割偶聯試驗時,識別位點[5’C(T)CCTT↓]的3’端堿基數量影響偶聯效率。 (4)共價復合物進行DNA分子連接時,底物5’-端需要保留-OH基團。 |
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