細胞凋亡是細胞的基本特征之一,它在機體的胚胎發育、組織修復、內環境的穩定等方面起著十分重要的作用。 AnnexinV是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)高親和力特異性結合。以標記了FITC的 AnnexinV作為熒光探針,利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。
Propidium iodide(PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但凋亡中晚期和死細胞由于細胞膜破裂,因此PI能夠將細胞核染紅。將AnnexinV與PI聯合使用,可以區分活細胞(FITC/PI均為陰性)、凋亡早期 細胞(FITC陽性、PI均為陰性)、凋亡晚期或死細胞(FITC/PI均為陽性)。
本細胞凋亡檢測試劑盒使用改進型的高純度FITC染料,其在紅色通道(690nm)無發射光,因此極大的減少了對紅色通道的干擾。使用該試劑盒進行細胞凋亡檢測時熒光相互干擾更小、檢測更準確。
組分 | ||||||||||
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應用 | ||||||||||
細胞凋亡檢測 | ||||||||||
儲存 | ||||||||||
2~8℃,有效期1年。 | ||||||||||
注意事項 | ||||||||||
1. 整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作。 2. 反應完畢后請盡快檢測,反應1 小時后熒光強度就開始衰變。 3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物質,在操作時請注意避光。 4. 試驗操作過程中佩戴手套等防護用品。 5. 試驗開始前將一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超純水(1:9)稀釋至 1×備用。 | ||||||||||
實例 | ||||||||||
圖:將融合度90%的Hela細胞分兩組,一組作為對照組正常培養,另一組向培養基中加入終濃度為500μM的H2O2處理1h,后收集細胞,用細胞凋亡檢測試劑盒(HaiGene,S0185)處理后上流式細胞儀檢測,用Flowjo軟件分析,結果如圖。注:橫坐標為FITC染色,縱坐標為PI染色。 |