HiFi One-Step RT-PCR Mix

英文名稱：HiFi One-Step RT-PCR Mix
產(chǎn)品編號(hào)：D0405A
產(chǎn)品類別：核酸擴(kuò)增/純化
檢測(cè)方法：PCR
檢測(cè)樣本：RNA
存儲(chǔ)條件：-20℃
保質(zhì)期：2年

規(guī)格

價(jià)格庫(kù)存

250T

￥ 1500 1

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本試劑采用穩(wěn)定高效的RT-PCR預(yù)混體系，是以RNA為模板進(jìn)行一步法RT-PCR的專用試劑。其原理為用基因特異性引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得第一鏈cDNA（不可使用Oligo（dT）或Random Rimer合成第一鏈cDNA），再使用基因特異性正向引物和反向引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在同一反應(yīng)體系中一步完成從反轉(zhuǎn)錄到PCR的全部過(guò)程。反應(yīng)體系中已含有電泳所需的指試劑（藍(lán)色和黃色），反應(yīng)后可以直接進(jìn)行電泳。
在本試劑中，將耐熱M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶、Rnase Inhibitor、Hotstart高保真DNA聚合酶以及穩(wěn)定劑等配制成50×One-Step Enzyme Mix預(yù)混液；反應(yīng)Buffer、dNTP以及電泳指示染料配制成5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer，因此使得操作更加簡(jiǎn)單便，擴(kuò)增產(chǎn)物可用于平端克隆和DNA測(cè)序。

組分

組分名稱	250T
50×One-Step Enzyme Mix	100 μl
5×HiFi One-Step RT-PCR Buffer	1 ml
RNase Free H₂O	1 ml×3

注意：1.50×One-Step Enzyme Mix粘度高，第一次使用之前要離心收集至反應(yīng)管底部，吸取時(shí)應(yīng)緩慢小心。
2.由于使用了Hotstart高保真DNA聚合酶，反應(yīng)配制可在常溫進(jìn)行，但各組分應(yīng)-20°C保存。

主要特征

耐熱M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶可在55℃反應(yīng)能更好的打開(kāi)復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)，只需10min即可完成逆轉(zhuǎn)錄。
DNA聚合酶為熱啟動(dòng)型高保真酶，能夠有效的抑制非特異性反應(yīng)且具有較高的校正活性，酶激活僅需2min。
具有寬泛的模板量兼容性，10 ng~1μg都可有效擴(kuò)增。
反應(yīng)過(guò)程中無(wú)需開(kāi)蓋，避免了操作過(guò)程中的污染危害。

儲(chǔ)存

請(qǐng)置于-20°C，可保存2年；避免反復(fù)凍融。

實(shí)例

1.以Hela細(xì)胞總RNA為模板，使用HiFi One Step RT PCR Mix擴(kuò)增不同長(zhǎng)度的目的片段。電泳結(jié)果顯示，166bp～4128bp 的 DNA 片段都得到了良好的擴(kuò)增。

基因名稱	模板使用量
gDNA：500bp、2kb、5kb、8kb、12kb	≤2kb 50ng 2kb~8kb 100ng ＞8kb 200ng
λDNA：500bp、1kb、2kb、5kb、8kb、15kb、20kb	50 ng
Hela cDNA：166bp、552bp、1574bp、1705bp、2755bp、4128bp	≤2kb 相當(dāng)mRNA 50ng ＞2kb 相當(dāng)mRNA 200ng

>1000 bp	1000~3000 bp	>3000 bp
55°C，10min	55°C，10min	55°C，10min
95°C，2min	95°C，2min	95°C，2min
95°C，20s 58°C，20s 72°C，30s32cycles	95°C，20s 58°C，20s 72°C，1min20s32cycles	95°C，20s 58°C，20s 72°C，2min 5s32cycles
72°C，2min	72°C，2min	72°C，2min

M：D10000 DNA Marker，1-7分別為：β-actin(166bp)、GAPDH (552bp)、GAPDH(960bp)、BMP2 (1574bp)、PRKN (1705bp)、TFRC (2755bp)和TFRC( 4128bp)。

2. 以Hela細(xì)胞總RNA為模板，使用不同的RNA模板量（1 ng、10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、600 ng、800 ng、1 μg）進(jìn)行HiFi One Step RT PCR Mix擴(kuò)增。電泳結(jié)果顯示，三種不同長(zhǎng)度的片段都獲得良好的擴(kuò)增，過(guò)多的模板可能會(huì)抑制擴(kuò)增。

960bp	1574bp	4128bp
55°C，10min	55°C，10min	55°C，10min
95°C，2min	95°C，2min	95°C，2min
95°C，20s 58°C，20s 72°C，30s32cycles	95°C，20s 58°C，20s 72°C，1min20s32cycles	95°C，20s 58°C，20s 72°C，2min 5s32cycles
72°C，2min	72°C，2min	72°C，2min