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Bsu DNA Polymerase

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Bsu DNA聚合酶是具有鏈置換活性的DNA恒溫擴增聚合酶,主要應(yīng)用于RPA重組酶擴增。重組酶UvsX與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列;一旦引物定位了同源序列,就會發(fā)生鏈交換反應(yīng),Bsu DNA聚合酶啟動DNA合成,對模板上的目標區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合,防止進一步替換。
Bsu DNA 聚合酶來源于 嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillus subtilis),系將Bacillus subtilis DNA 聚合酶(Bsu) I 基因的前296個AA截去而得。該酶保留了Bsu I 的 5´-3´ 聚合酶活性,但是缺失了 5´-3´ 核酸外切酶結(jié)構(gòu)域,該酶自身缺失 3´-5´ 核酸外切酶活性,可用于重組酶擴增。

應(yīng)用

  • 隨機引物法標記
  • cDNA 第二條鏈的合成
  • 單個 dA 的加尾
  • 鏈置換的 DNA 合成

活性定義

在37℃條件下,30min內(nèi)參入10nmol酸性不容物定義為1個活性單位。

性能測試

按照如下體系配制反應(yīng):
Plasmid DNA                                    100 ng
10×Bsu Reaction Buffer                        5 μl
Random9 (100μM)                               2 μl
dNTP mixture(10 mM)                          2 μl
Rnase free H2O                           upto 50 μl
混勻后95℃ 5min,然后冰上放置5min,分別加入不同劑量Bsu DNA聚合酶(泳道1-2:0, 泳道3-4:0.5 μl, 泳道5-6:1 μl,泳道7-8:2 μl,泳道9-10:4 μl,),分別在25℃和37℃孵育3h,電泳檢測各組產(chǎn)物如下圖
Bsu dna聚合酶

1X Bsu Reaction Buffer

50 mM NaCl ,10 mM Tris-HCl (Ph7.5) , 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT

儲存

-20℃可保存2年,避免反復(fù)凍融。

熱失活

75°C,20min。

注意事項

1、由于缺乏3 ´-5 ´核酸外切酶活性,Bsu DNA 聚合酶不能切除 3´未配對的突出末端,因而不適用于生成平齊末端。
2、25℃ 時 Bsu DNA 聚合酶 保留 50% 的活性,是同溫度下 Klenow 片段(3´-5´ exo-)的兩倍。
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