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耐熱反轉錄酶 ThermoStable V Reverse Transcriptase

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耐熱反轉錄酶(ThermoStable V Reverse Transcriptase)是在鼠源病毒反轉錄酶基礎上進行定點突變改良而得。該酶去除了RNase H活性中,從而避免反轉錄過程中降解RNA。同時經過突變文庫篩選,使得其熱穩定性更強,可耐受65℃高溫反應。相比于低溫條件下反轉錄反應,采用高溫反轉錄可顯著打開RNA二級結構,從而提高復雜RNA模板的擴增性能、提高反轉錄cDNA的長度和產量,從而提高后續檢測的靈敏度。

組分

組分名稱 數量
ThermoStable V RTase (200 U/μl) 100 μl
10×RT Buffer 0.4 ml

單位定義

以poly(rA)為模板、oligo(dT)為引物,在37°C條件下,10分鐘內催化1 nmol的dTTP摻入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定義為一個活性單位。

儲存

-20°C可保存2年。

反應實例

以人RNA為模板,應用耐熱反轉錄酶和M-MuLV反轉錄酶分別在50°C、55°C、60°C和65°C進行反轉錄反應,反應時間為15min,然后進行PCR擴增獲得542bp的片段。
耐熱反轉錄酶
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