pUC57 Simple TA/平端通用克隆載體（含感受態）

產品編號：D2401
產品類別：核酸擴增/純化
存儲條件：-20℃
保質期：2年

規格

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20T

￥ 980 2

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pUC57 Simple通用克隆載體采用了TOPO酶連接技術，載體預先偶聯上TOPO酶，當加入PCR擴增產物后，5 min就可以完成連接反應，連接陽性率高。pUC57 Simple通用克隆載體消除了大部分的常用酶切位點，便于后續亞克隆。該產品適用于Taq酶擴增的含“A”尾巴和高保真酶擴增的PCR產物的連接，載體含有氨芐青霉素抗性篩選標記。

優勢

快速連接，最快僅需5min；
操作簡單，僅需加入載體和片段即可；
無需藍白斑篩選，陽性率高；
不包含任何酶切位點，便于后續亞克隆。
平末端和A尾產物通用。
注意：引物不能磷酸化。

組分

組分名稱	D2401（20T）	D2402 (20T)
pUC57 Simple Vector(5 ng/μl)	20μl	20μl
M13F(-47) (10 μM)	100μl	100μl
M13R(-47) (10 μM)	100μl	100μl
RTS DH5α凍干感受態	2瓶	無
Nano E.coli Transfection Reagent	1 ml	無

儲存

RTS DH5α凍干感受態在未溶解狀態下，可于-20℃長期保存（>2年），已經溶解后，請-60℃以下保存（3個月）。

圖譜

測序引物

正向測序引物：M13F(-47): 5’- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’；
反向測序引物：M13R(-48): 5’- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’；

實例

1.應用pUC57 Simple TA平端通用克隆載體分別連接長度為2008bp的平端產物和A尾產物，挑20個菌進行菌檢，陽性率分別為95%和85%。

2.不同的載體與片段的摩爾比對連接效率的影響
片段長2432bp，使用載體與片段摩爾比分別為1:1；1:2；1:3；1:4；1:5；1:6；1:7；1:8；1:9；1：10 室溫連接5min后轉入RTS-DH5α凍干感受態，通用引物菌檢陽性片段長度為菌檢陽性片段大小為2572bp。結果表明載體與片段摩爾比1:1；1:2；1:3；1:4；1:6；1:9時均有較高的陽性率，而1:5；1:7；1:8；1：10則陽性率稍低，說明連接反應時應選擇正確的載體與連接片段摩爾比，推薦最佳摩爾比為1:3。

3.不同連接時間對連接效率的影響
平端產物片段長2432bp，載體與片段摩爾比分別為1:3，分別室溫連接5min、10min、15min、20min、25min、30min后轉入RTS-DH5α凍干感受態，通用引物菌檢陽性片段長度為菌檢陽性片段大小為2572bp。結果表明不同的連接時間對于菌斑數和陽性率的影響較小，無明顯差別，建議當連接片段<2500bp時，可選擇室溫連接5min。

4.不同長度的平端產物片段對連接效率的影響
平端產物片段長度分別為500bp、1kb、2kb和5kb，載體與片段摩爾比分別為1:3，前三個片段室溫連接5min，5kb片段室溫連接30min，轉入RTS-DH5α凍干感受態，通用引物菌檢。結果表明長片段連接后菌斑數較短片段減少，但陽性率無明顯差別。

5.不同長度的A尾產物片段對連接效率的影響
A尾產物片段長度分別為500bp、1kb、2kb、2.5kb和5kb，載體與片段摩爾比分別為1:3，前四個片段室溫連接5min，5kb片段室溫連接30min，轉入RTS-DH5α凍干感受態，通用引物菌檢。結果表明片段長度在500bp~2.5kb之間時陽性率無明顯差別，當片段長度≥5kb時陽性率有所降低，此時應適當增加菌檢數量。