| 熱敏雙鏈DNA特異性核酸酶(Heat labile ds-DNA-specific Nuclease，又名ezDNase或HL dsDNase)，為雙鏈特異性核酸酶。其特異性的識別降解雙鏈DNA，對單鏈DNA或RNA幾乎無活性，其降解dsDNA的能力比ssDNA高~5000倍。除此外，該雙鏈DNA特異性核酸酶降解雙鏈DNA的能力比bovine DNaseI高~30倍，因此特別適用于去除RNA樣品中的基因組DNA污染。該熱敏型雙鏈DNA核酸酶可將DNA降解為2~8bp的產物，且55℃ 5min可使該酶不可逆失活，同時又能保持RNA和ssDNA的穩定性，因此產物無需再純化，可直接用于后續反應。同時該酶與M-MLV和AMV的反應Buffer都是兼容的，可應用于反轉錄反應中去除樣本中基因組DNA的污染，提高反轉錄效率。 | |||||||
單位定義 | |||||||
| 1單位指在25℃標準反應條件下，每分鐘OD260增加0.001（約每分鐘消化1pmol核酸底物）所需的酶量。 | |||||||
組分 | |||||||
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儲存 | |||||||
| 置于-20°C，可保存3年。 | |||||||
使用注意事項 | |||||||
| （（1）1×dsDNase Buffer：20mM Tris-HCl pH8, 2mM MgCl2。該酶需要1~3mM MgCl2。 （2）該酶對DTT敏感，任何反應體系中不得包含DTT。 （3）通常在RT反應中的用量為0.1~0.5U/20 μl體系。 （4）任何濃度的SDS、鹽酸胍、β-mercaptoethanol或高鹽離子（>300mM）均抑制該酶活性。 （5）該酶的最佳反應溫度為25~37℃，42℃ 30min后活性損失70%。 | |||||||
實例 | |||||||
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| 取人基因組2.5 μg，分別用0、0.125、0.25、0.5、1 μl的熱敏雙鏈DNA特異性核酸酶37℃消化15min，如圖所示。 | |||||||
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