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核酸外切酶I(Exonuclease I, E.coli)

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核酸外切酶I(Exonuclease I)具有從3’-5’方向降解單鏈 DNA 的外切酶活性,能夠逐步釋放脫氧核糖核酸5'單磷酸,并留下完整的5'端二核苷酸。該酶來源于攜帶有E. coli exo I 基因的質粒,經重組表達純化而得。Exonuclease I多用于PCR擴增后降解消化引物,該酶對于雙鏈DNA和磷酰或乙酰基團封閉的3’OH末端DNA鏈無活性。

單位定義

1 單位指在 37℃ 條件下,30 分鐘內催化釋放 10 nmol 的酸溶性核苷釋放所需要的酶量。

組分

名稱 數量
Exonuclease I(20 U/μl) 75 μl
10×ExoI Buffer 1 ml

應用

  • 從PCR混合物中去除引物
  • PCR產物測序之前用于在單管中使用大引物進行的PCR誘變反應
  • 從核酸混合物中去除含有3'羥基末端的單鏈DNA
  • 檢測含有3'羥基末端的單鏈DNA的存在

儲存

置于-20°C,可保存3年。

使用注意事項

(1)1×ExoI Buffer:67mM Glycine-KOH pH 9.5,6.7mM MgCl2,10mM 2-巰基乙醇。該酶在常規PCR Buffer中也具有活性。
(2)該酶的最佳反應溫度為37°C,80°C 20min可失活。
(3)該酶不能切割雙鏈DNA,因此含有二級結構的單鏈DNA需要變性后才能完全消化。
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