| Rnase Free DNase I是將單鏈或雙鏈 DNA 同等程度的隨機(jī)分解，生成具有 5′-P 末端寡核苷酸的脫氧核糖核酸內(nèi)切酶。由于RNase-free DNase I中Protease已幾乎被完全去除，從而提高了該酶在 pH 中性區(qū)域的穩(wěn)定性。此外Rnase Free DNase I中添加了Rnase Inhibitor，用于抑制RNA樣品中殘留的RNase核酸酶，因此可以有效抑制RNA提取過程中Rnase酶對(duì)RNA的降解。Stop Buffer終止反應(yīng)后，可通過一步加熱失活DNase I活性。 | |||||||||
單位定義 | |||||||||
| 在50 μl體系下，37℃ 10min條件下完全消化1 μg pBR322質(zhì)粒DNA所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。 | |||||||||
組分 | |||||||||
*Rnase Free DNase I (2 U/μl)中含有20U/μl的Rnase Inhibitor，故進(jìn)行消化試驗(yàn)時(shí)不需要再額外添加Rnase Inhibitor。 | |||||||||
純度 | |||||||||
| 2U的本酶和1μg的16S, 23S rRNA在37℃、pH7.5的條件下反應(yīng)1小時(shí)，RNA的電泳譜帶不發(fā)生變化 | |||||||||
儲(chǔ)存 | |||||||||
| 置于-20°C，可保存2年。 | |||||||||
使用注意事項(xiàng) | |||||||||
| 1）通常加熱方法即可失活DNase I。如需要去除殘留的變性蛋白，可在37°C消化完畢后使用酚氯仿抽提并沉淀RNA樣品（不進(jìn)行加熱操作）。 2）10× RD Stop Buffer中含有螯合劑用于去除二價(jià)陽(yáng)離子，進(jìn)行加熱失活前，必須加入2 μl 10× RD Stop Buffer并混合均勻，再進(jìn)行熱失活，否則會(huì)導(dǎo)致RNA降解。 3）處理完畢的RNA樣品進(jìn)行一步反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)，添加量需要<20%（如20μl的反轉(zhuǎn)錄體系中加入量要<4μl） | |||||||||
功能測(cè)試 | |||||||||
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