儀器準備:1光學顯微鏡,2.染缸,3.移液器,4.秒表,5.冰盒,6.載玻片,7.吸頭,8.一次性手套,9.純水
使用方法:
注意:所有的工作液請使用前新鮮配制,配制后立即使用,一次使用完,不可放置。
樣本的染色處理:
一、血涂片及骨髓涂片
1、推片:
取全血或骨髓3ul左右置載玻片上,將推玻片保持與載玻片30°角,置于血滴正前方,稍微往后移與血滴接觸,血滴沿推片下緣散開,再勻速沿載玻片平面平穩向前滑動,至血滴鋪完血膜為止。不要太薄,以免細胞太少,也不要太厚,以免太重疊。
2、固定:
讓涂片在空氣中自然晾干,再放入本試劑盒中的固定液A中固定2-3分鐘,水洗30-60秒。
3、孵育:
水洗后還未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分鐘。太干后染色效果會變差。
4、復染:
孵育完后,取出水洗1分鐘,在玻片未完全干前進行復染。可用蘇木素復染1-2分鐘,或者用甲基綠復染2-3分鐘,兩者任選其一即可。
二、細胞涂片及細胞爬片
1、固定:
將細胞涂片或細胞爬片放入本試劑盒中的固定液A中固定2-3分鐘,水洗30-60秒。
2、孵育:
水洗后還未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分鐘。太干后染色效果會變差。
3、復染:
孵育完后,取出水洗1分鐘,在玻片未完全干前進行復染。可用蘇木素復染1-2分鐘,或者用甲基綠復染2-3分鐘,兩者任選其一即可。
三、冰凍切片
1、回溫:
將保存在-20℃冰箱中的冰凍切片放置到切片架上回溫5-10分鐘。可以放在37℃孵箱中進行回溫,或者將切片架放置在一個小盒子中,將盒子置于37℃水浴鍋中進行回溫。
2、水合:
將回溫好的切片,水中浸泡1-2分鐘。
3、固定:
讓切片在空氣中自然晾干,再放入本試劑盒中的固定液中固定2-3分鐘,水洗30-60秒。
4、孵育:
水洗后還未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分鐘。太干后染色效果會變差。
5、復染:
孵育完后,取出水洗1分鐘,在玻片未完全干前進行復染。可用蘇木素復染1-2分鐘,或者用甲基綠復染2-3分鐘,兩者任選其一即可。
四、石蠟切片
1、脫蠟:
二甲苯中脫蠟5-10分鐘。再換用新鮮的二甲苯脫蠟5-10分鐘。
2、浸泡:
無水乙醇浸泡5分鐘。再分別用90%、70%乙醇各2分鐘。
3、水合:
蒸餾水中浸泡2分鐘。
4、孵育:
還未完全干前放入底物孵育液中避光孵育60分鐘。太干后染色效果會變差。
5、復染:
孵育完后,取出水洗1分鐘,在玻片未完全干前進行復染。可用蘇木素復染1-2分鐘,或者用甲基綠復染2-3分鐘,兩者任選其一即可。
結果分析:
陽性反應為鮮紅色或深紅色顆粒,定位于胞漿中。
注意事項:
1.TRAP孵育液易失效,本法宜用皮膚穿刺血涂片,晾干后應及時染色;
2.對冰凍切片染色時,應減少切片在室溫暴露的時間。
3.樣本需新鮮,取材后應立即處理,否則會影響酶的活性。
4.組織固定需在4℃冰箱進行,時間不宜超過24h,否則酶活性會減弱或消失。
5.一般不建議用石蠟切片。如果需要用石蠟切片,組織在石蠟包埋時,溫度不宜高于56℃。應使用熔點為52~54℃的石蠟進行浸蠟,浸蠟時間要短,否則酶活性會減弱或消失。
6.石蠟切片不需要固定。
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