產(chǎn)品概述 product description
蛋白脫鹽柱是一種方便的蛋白脫鹽工具，只需要離心操作即可以用來(lái)對(duì)蛋白質(zhì)液體樣本進(jìn)行脫鹽，還可以用于蛋白質(zhì)、抗原、抗體、酶和微生物的濃縮純化。也可以用來(lái)對(duì)蛋白質(zhì)樣品中的鹽分、糖類、核酸、非水溶劑及其他一些低分子量物質(zhì)進(jìn)行去除和緩沖液置換。還可以用來(lái)分離蛋白質(zhì)標(biāo)記時(shí)未結(jié)合上的游離標(biāo)記物。 蛋白脫鹽柱使用蛋白質(zhì)低吸附性的BBproExtraTM再生纖維素過(guò)濾膜制造，具有快速、方便、回收率高的特點(diǎn)，可替代并優(yōu)于透析法脫鹽及蛋白沉淀法蛋白濃縮。 蛋白脫鹽柱有多種規(guī)格可供選擇。 可以提供針對(duì)動(dòng)物細(xì)胞、組織、植物、真菌、酵母、微生物、液體、土壤等不同樣本的蛋白提取試劑盒，包含用于非雙向電泳和雙向電泳等不同下游應(yīng)用的試劑盒以及含去垢劑成分和不含去垢劑成分的蛋白提取試劑盒，總計(jì)300多種蛋白提取試劑盒可供選擇。還可以提供針對(duì)動(dòng)物、植物等不同樣本的細(xì)胞核、線粒體、溶酶體、葉綠體等不同細(xì)胞器的提取試劑盒。
保存溫度
室溫
注意事項(xiàng)
1.脫鹽柱配有2個(gè)微量離心套管。
2.在操作過(guò)程中，一個(gè)可用于收集濾出液，而另一個(gè)用于回收脫鹽后的樣本。
3.用過(guò)的脫鹽管要保持過(guò)濾膜濕潤(rùn)，不能干掉。
2.在操作過(guò)程中，一個(gè)可用于收集濾出液，而另一個(gè)用于回收脫鹽后的樣本。
3.用過(guò)的脫鹽管要保持過(guò)濾膜濕潤(rùn)，不能干掉。
有效期
一年
產(chǎn)品特點(diǎn)
1、 高回收率 >90%；
2、 垂直結(jié)構(gòu)的膜減少了濃差極化，加快離心速度，快達(dá) 5 分鐘；
3、 熱密封膜將下游溶出物污染可能性降到最低；
4、 100% 完整性檢測(cè)確保性能可靠；
5、 透明外殼和體積刻度方便樣品察看；
6、 直接吸取樣品減少處理步驟；
7、 高濃縮倍數(shù)：高達(dá)80–100 倍
2、 垂直結(jié)構(gòu)的膜減少了濃差極化，加快離心速度，快達(dá) 5 分鐘；
3、 熱密封膜將下游溶出物污染可能性降到最低；
4、 100% 完整性檢測(cè)確保性能可靠；
5、 透明外殼和體積刻度方便樣品察看；
6、 直接吸取樣品減少處理步驟；
7、 高濃縮倍數(shù)：高達(dá)80–100 倍
儀器準(zhǔn)備
1.離心機(jī)；可容納1.5ml微量離心管的固定角度轉(zhuǎn)子離心機(jī)。
2.移液器
3.冰箱
2.移液器
3.冰箱
試劑準(zhǔn)備
1.純水
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
2.吸頭
使用注意事項(xiàng)
1.不同的蛋白脫鹽的速度不同，有的需要長(zhǎng)時(shí)間離心，有的則很快就好。和蛋白樣品純度，所用buffer類型，蛋白的濃度有關(guān)系。離心時(shí)要先短些時(shí)間，觀察一下脫鹽速度；
2.如果需要多次重復(fù)使用，離心速度不要太高；
3.重復(fù)使用時(shí)要仔細(xì)檢查管壁上有沒(méi)有裂紋；
4.脫鹽柱濃縮蛋白會(huì)有蛋白損失，樣品體積大就分批離心，盡可能不要離心時(shí)間太長(zhǎng)
5.樣品里的雜質(zhì)如果可能盡量在離心前去除一些。
6.分子量小于5kD的溶質(zhì)可能只有部分被截留。2kD的樣品截留率大約只有40%。過(guò)濾膜的截留率取決于溶質(zhì)的分子大小和形狀。目的蛋白小于5kD的樣品不要使用脫鹽柱脫鹽。
7.濃縮液的樣本回收率低可能是由于吸附損失、過(guò)度濃縮，或樣本穿過(guò)濾膜而造成的。
8.吸附損失取決于溶質(zhì)濃度、疏水性、與過(guò)濾脫鹽管表面接觸的溫度和時(shí)間、樣本成分及pH。為了最大限度降低損失，離心后請(qǐng)立即回收脫鹽后的樣本。
9.如果樣本的起始濃度很高，請(qǐng)監(jiān)控離心過(guò)程，以免樣本過(guò)度濃縮。過(guò)度濃縮會(huì)導(dǎo)致沉淀，這也可能帶來(lái)樣本損失。
10.樣本有可能穿過(guò)濾膜，務(wù)必將每次的濾過(guò)液一直保留到脫鹽的樣品分析測(cè)試完成。
11.樣品蛋白最低起始濃度為25ug/ml。
12.加蛋白液或Buffer到脫鹽管時(shí)，可以用藍(lán)槍頭；但從脫鹽管底吸取脫鹽好的目的蛋白時(shí)，必須用黃槍頭；用槍頭伸入脫鹽管中時(shí)，必須防止碰到濾膜，以免戳破濾膜。
2.如果需要多次重復(fù)使用，離心速度不要太高；
3.重復(fù)使用時(shí)要仔細(xì)檢查管壁上有沒(méi)有裂紋；
4.脫鹽柱濃縮蛋白會(huì)有蛋白損失，樣品體積大就分批離心，盡可能不要離心時(shí)間太長(zhǎng)
5.樣品里的雜質(zhì)如果可能盡量在離心前去除一些。
6.分子量小于5kD的溶質(zhì)可能只有部分被截留。2kD的樣品截留率大約只有40%。過(guò)濾膜的截留率取決于溶質(zhì)的分子大小和形狀。目的蛋白小于5kD的樣品不要使用脫鹽柱脫鹽。
7.濃縮液的樣本回收率低可能是由于吸附損失、過(guò)度濃縮，或樣本穿過(guò)濾膜而造成的。
8.吸附損失取決于溶質(zhì)濃度、疏水性、與過(guò)濾脫鹽管表面接觸的溫度和時(shí)間、樣本成分及pH。為了最大限度降低損失，離心后請(qǐng)立即回收脫鹽后的樣本。
9.如果樣本的起始濃度很高，請(qǐng)監(jiān)控離心過(guò)程，以免樣本過(guò)度濃縮。過(guò)度濃縮會(huì)導(dǎo)致沉淀，這也可能帶來(lái)樣本損失。
10.樣本有可能穿過(guò)濾膜，務(wù)必將每次的濾過(guò)液一直保留到脫鹽的樣品分析測(cè)試完成。
11.樣品蛋白最低起始濃度為25ug/ml。
12.加蛋白液或Buffer到脫鹽管時(shí)，可以用藍(lán)槍頭；但從脫鹽管底吸取脫鹽好的目的蛋白時(shí)，必須用黃槍頭；用槍頭伸入脫鹽管中時(shí)，必須防止碰到濾膜，以免戳破濾膜。
使用方法
清洗濃縮柱：
1. 用緩沖液或純水進(jìn)行預(yù)清洗。也可先用0.1 M NaOH清洗，再用緩沖液或純水進(jìn)行二次清洗。
2. 離心管中的過(guò)濾膜一旦潤(rùn)濕后應(yīng)避免變干。如果在預(yù)清洗后不是立即使用，則讓液體保留在濾膜上，直到使用。
濃縮使用方法：
操作步驟：
1. 將內(nèi)管插入所提供的一個(gè)微量離心管中。
2. 向內(nèi)管中加入不超過(guò)500 ul的樣本，并蓋上蓋子。
3. 將蓋好蓋子的濃縮管放入離心轉(zhuǎn)子中，讓蓋子的連接帶朝著轉(zhuǎn)子的中央；用一個(gè)類似的離心管平衡。
4. 以2000-10000 x g離心約10-30分鐘。
5. 離心結(jié)束后將整個(gè)濃縮管從離心機(jī)中取出，取出內(nèi)管。
6. 為了回收濃縮后的溶質(zhì)，將內(nèi)管倒過(guò)來(lái)插在另一個(gè)干凈的微量離心管中。放在離心機(jī)中，讓打開的蓋子朝著轉(zhuǎn)子的中央；用一個(gè)類似的離心管進(jìn)行平衡。以1,000 x g離心2分鐘，使?jié)饪s后的樣本從濃縮內(nèi)管轉(zhuǎn)移到收集管中。濾液可以保存在收集管中。
脫鹽使用方法：
操作步驟：
1. 把樣品置于過(guò)濾裝置的儲(chǔ)液管中；
2. 如果樣品體積小于過(guò)濾裝置的最大體積，則可以把它稀釋到最大體積后再離心，這有助于更有效地除去鹽分；
3. 在特定的離心力下和推薦的時(shí)間進(jìn)行離心；
4. 將濾過(guò)液從濾管中取出，放置一旁；
5. 加入水或緩沖液使樣品體積達(dá)到0.5ml；
6. 再次離心；
7. 取出濾過(guò)液，放置一旁；
8. 回收濃縮的已脫鹽樣品。
清洗和保存：
1. 使用后用水沖洗干凈；
2. 內(nèi)管加入超純水500µl，5000g離心5分鐘；
3. 凈內(nèi)管中的水，加入500µl 0.1M NaOH，5000g離心20分鐘；
4. 用0.1M NaOH 浸泡24小時(shí)；
5. 用水沖洗干凈；
6. 用無(wú)菌水浸泡2-8℃保存。
7. 外管用自來(lái)水洗凈后，用超純水沖洗干凈，晾干。
常見問(wèn)題分析
1.蛋白脫鹽柱會(huì)損失蛋白嗎？
分子量小于3000 Da的蛋白質(zhì)或多肽樣品會(huì)穿透過(guò)濾膜，不適合用本脫鹽柱進(jìn)行脫鹽。3000 -6000Da的蛋白質(zhì)會(huì)有少量損失。6000Da以上的蛋白質(zhì)損失很小。
2.膜會(huì)因?yàn)殡x心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而變干么？
不會(huì)，因?yàn)槊擕}柱有死體積，總會(huì)有溶液殘留在濾管中。死體積大約10-20ul。
3.可以重復(fù)使用脫鹽柱么？
可以重復(fù)使用。如果使用、清洗、保存得當(dāng)，可以反復(fù)使用多次。但是多次重復(fù)使用后過(guò)濾膜有破損風(fēng)險(xiǎn)，注意使用過(guò)程中盡量避免尖銳物品戳到膜。離心力不要過(guò)大。
分子量小于3000 Da的蛋白質(zhì)或多肽樣品會(huì)穿透過(guò)濾膜，不適合用本脫鹽柱進(jìn)行脫鹽。3000 -6000Da的蛋白質(zhì)會(huì)有少量損失。6000Da以上的蛋白質(zhì)損失很小。
2.膜會(huì)因?yàn)殡x心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而變干么？
不會(huì)，因?yàn)槊擕}柱有死體積，總會(huì)有溶液殘留在濾管中。死體積大約10-20ul。
3.可以重復(fù)使用脫鹽柱么？
可以重復(fù)使用。如果使用、清洗、保存得當(dāng)，可以反復(fù)使用多次。但是多次重復(fù)使用后過(guò)濾膜有破損風(fēng)險(xiǎn)，注意使用過(guò)程中盡量避免尖銳物品戳到膜。離心力不要過(guò)大。
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