O92細(xì)胞缺氧檢測(cè)試劑盒是一種利用O92紅色熒光探針進(jìn)行細(xì)胞缺氧狀態(tài)檢測(cè)的試劑盒。 O92熒光探針可自由透過(guò)活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，并與細(xì)胞內(nèi)的缺氧損傷產(chǎn)物反應(yīng)，形成紅色熒光產(chǎn)物，產(chǎn)生紅色熒光。紅色熒光隨著缺氧程度的增加而增強(qiáng)。因此，根據(jù)活細(xì)胞中紅色熒光的產(chǎn)生，可以判斷細(xì)胞缺氧的變化。 用激光共聚焦/熒光顯微鏡可直接檢測(cè)觀察或流式細(xì)胞儀/熒光酶標(biāo)儀/光度計(jì)檢測(cè)，是一種快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞中缺氧變化的檢測(cè)方法。 O92在激發(fā)波長(zhǎng)536 nm，發(fā)射波長(zhǎng)580 nm附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測(cè)熒光，從而測(cè)定細(xì)胞內(nèi)缺氧狀況。 本試劑盒可以用于各種真核培養(yǎng)細(xì)胞、培養(yǎng)或灌流組織及新鮮組織振動(dòng)/冰凍切片的檢測(cè)。 O9系列缺氧檢測(cè)熒光探針有各種顏色可供選擇，除了本試劑盒的紅色熒光探針外，貝博還可以提供綠色、橙色、紫色等不同試劑盒選擇。 缺氧是惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中普遍存在的現(xiàn)象,其產(chǎn)生主要與腫瘤無(wú)限制生長(zhǎng)、氧耗增加、血供不足及腫瘤組織血管發(fā)育不良等有關(guān),也是臨床多種疾病共有的病理過(guò)程。缺氧環(huán)境下的腫瘤細(xì)胞易發(fā)生轉(zhuǎn)移,并且能增加對(duì)放療、化療的抗拒性,從而降低了治療效果。因此,研究缺氧的發(fā)生和發(fā)展規(guī)律,對(duì)臨床治療、增強(qiáng)機(jī)體代償適應(yīng)能力都有重要意義。 細(xì)胞缺氧通常可導(dǎo)致胞內(nèi)的硝基還原酶(Nitroreductase,NTR)的增加。在缺氧條件下，以還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(Reduced nic-otinamide adenine dinucleotide,NADH)作為電子供體，細(xì)胞內(nèi)的硝基還原酶可催化多種外源硝基芳香族化合物發(fā)生單電子轉(zhuǎn)移，生成硝基陰離子自由基，隨后進(jìn)一步被還原成羥胺或氨基。 細(xì)胞缺氧通常通過(guò)HIF蛋白表達(dá)、基因表達(dá)、細(xì)胞活性等方法檢測(cè)，但是這些方法比較麻煩，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的熟練程度要求，O92細(xì)胞缺氧檢測(cè)試劑盒通過(guò)細(xì)胞缺氧后的氧化應(yīng)激反應(yīng)檢測(cè)細(xì)胞的缺氧損傷，能夠簡(jiǎn)單快捷的反映的細(xì)胞缺氧損傷的情況。 包括細(xì)胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、細(xì)胞代謝、氧化應(yīng)激、膜流動(dòng)性、膜電位、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞耗氧率、胞外酸化、細(xì)胞內(nèi)pH、細(xì)胞粘附、細(xì)胞自噬等數(shù)百種細(xì)胞檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品。 可以為您提供各種細(xì)胞成像、細(xì)胞示蹤與追蹤試劑盒產(chǎn)品。包括各種顏色的 M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、骨架、微管等細(xì)胞、細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒產(chǎn)品，以及鈣離子、鈉離子、氬離子等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品。可以提供動(dòng)物、植物、微生物、酵母、水產(chǎn)、家禽、獸類、土壤等樣本的各種生化指標(biāo)檢測(cè)的數(shù)百種試劑盒產(chǎn)品。可以提供各種細(xì)胞、組織染色，免疫組織化學(xué)，細(xì)胞培養(yǎng)等相關(guān)試劑盒產(chǎn)品。
2.探針需密封保存。減少開(kāi)蓋次數(shù)。
3.避免反復(fù)凍融。可以根據(jù)需要分裝后凍存。
4.探針液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
5.可以用手捂住使其融解或37℃短時(shí)間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
6.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！
2.背景低，靈敏度高；
3.線性范圍寬，使用方便。
2.離心機(jī)
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.離心管
3.吸頭
4.一次性手套
2.熒光探針標(biāo)記后，一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針，否則會(huì)導(dǎo)致背景較高。
3.探針標(biāo)記完畢并洗凈殘余探針后，可以進(jìn)行激發(fā)波長(zhǎng)的掃描和發(fā)射波長(zhǎng)的掃描，以確認(rèn)探針的標(biāo)記情況是否正常。
4.盡量縮短探針標(biāo)記后到測(cè)定所用的時(shí)間，以減少各種可能的誤差。
5.O92在光照和空氣中易被氧化，注意避光密封保存。
6.對(duì)不同的細(xì)胞和組織，應(yīng)選擇合適的孵育時(shí)間和濃度，以觀察缺氧的變化。
O92溶液可在新鮮無(wú)血清培養(yǎng)液、PBS、HBSS、HEPES等緩沖鹽溶液中稀釋到所需濃度，100-1000倍稀釋，以此染色液更換細(xì)胞培養(yǎng)液；也可直接向細(xì)胞孵育液體中加入B O92探針溶液至所需濃度。
2. 依據(jù)細(xì)胞缺氧程度的不同，O92終濃度可選擇在100-1000倍稀釋的范圍，孵育時(shí)間可選擇60-120 分鐘，在37℃進(jìn)行避光孵育。
3. 孵育結(jié)束后，用新鮮溶液清洗細(xì)胞。
4. 檢測(cè)細(xì)胞熒光。
共聚焦/熒光顯微鏡檢測(cè)：
1. 對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下觀察；對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞，取25-50μl細(xì)胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。
2. 熒光顯微鏡下，用藍(lán)光或綠光激發(fā)，觀察和拍攝細(xì)胞紅色發(fā)射圖像，缺氧細(xì)胞被染成紅色。
流式細(xì)胞儀分析：
對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，用胰酶消化制備成單細(xì)胞懸液；對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞，直接收集細(xì)胞。用0.5~1 ml冷PBS重懸細(xì)胞（5~10萬(wàn)）。
采用480~536 nm波長(zhǎng)激發(fā)，測(cè)定580 nm~610 nm的發(fā)射。
陰性細(xì)胞僅有較低的熒光強(qiáng)度，缺氧細(xì)胞有較強(qiáng)的紅色熒光。 【注】:
細(xì)胞可能分成兩個(gè)亞群。
