產品概述 product description
缺氧是惡性腫瘤發生、發展過程中普遍存在的現象,其產生主要與腫瘤無限制生長、氧耗增加、血供不足及腫瘤組織血管發育不良等有關,也是臨床多種疾病共有的病理過程。缺氧環境下的腫瘤細胞易發生轉移,并且能增加對放療、化療的抗拒性,從而降低了治療效果。因此,研究缺氧的發生和發展規律,對臨床治療、增強機體代償適應能力都有重要意義。 細胞缺氧通常可導致胞內的硝基還原酶(Nitroreductase,NTR)的增加。在缺氧條件下，以還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(Reduced nic-otinamide adenine dinucleotide,NADH)作為電子供體，細胞內的硝基還原酶可催化多種外源硝基芳香族化合物發生單電子轉移，生成硝基陰離子自由基，隨后進一步被還原成羥胺或氨基。 細胞缺氧通常通過HIF蛋白表達、基因表達、細胞活性等方法檢測，但是這些方法比較麻煩，對實驗操作的熟練程度要求，O91細胞缺氧檢測試劑盒通過細胞缺氧后的氧化應激反應檢測細胞的缺氧損傷，能夠簡單快捷的反映的細胞缺氧損傷的情況。 O91細胞缺氧檢測試劑盒是一種利用O91綠色熒光探針進行細胞缺氧狀態檢測的試劑盒。 O91熒光探針可自由透過活細胞膜進入細胞內，并與細胞內的缺氧損傷產物反應，形成綠色熒光產物，產生綠色熒光。綠色熒光隨著缺氧程度的增加而增強。因此，根據活細胞中綠色熒光的產生，可以判斷細胞缺氧的變化。用流式細胞儀或熒光顯微鏡可直接檢測觀察，是一種快速簡便的細胞中缺氧變化的檢測方法。 O91在激發波長488nm，發射波長526 nm附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標儀、流式細胞儀等檢測熒光，從而測定細胞內缺氧狀況。 本試劑盒可以用于各種真核培養細胞、培養或灌流組織及組織冰凍切片的檢測。 O9系列缺氧檢測熒光探針有各種顏色可供選擇，除了本試劑盒的綠色熒光探針外，還可以提供紅色、橙色、紫色等不同試劑盒選擇。 可以提供細胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細胞代謝、氧化應激、細胞膜流動性、膜通透性轉換孔、細胞耗氧率、細胞內pH、細胞粘附、細胞自噬等數百種檢測試劑盒產品。 可以為您提供各種顏色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等細胞膜、細胞質、細胞核、溶酶體、線粒體、內質網、高爾基體、骨架、微管等細胞、細胞亞結構熒光染色試劑盒產品，以及鈣離子、鈉離子、氬離子等各種熒光染色試劑盒產品。 可以提供動物、植物、微生物、酵母、水產、家禽、獸類、土壤等樣本的各種生化指標檢測的數百種試劑盒產品。
2.探針需密封保存。減少開蓋次數。
3.避免反復凍融。可以根據需要分裝后凍存。
4.探針液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
5.可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。
6.試劑拆封后請盡快使用完！
2.背景低，靈敏度高；
3.線性范圍寬，使用方便。
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.離心管
3.吸頭
4.一次性手套
2.熒光探針在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.熒光探針標記后，一定要洗凈殘余的未進入細胞內的探針，否則會導致背景較高。
4.探針標記完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發波長的掃描和發射波長的掃描，以確認探針的標記情況是否正常。
5.盡量縮短探針標記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。
6.O91在光照和空氣中易被氧化，注意避光密封保存。
7.對不同的細胞和組織，應選擇合適的孵育時間和濃度，以觀察缺氧的變化。
原位標記：僅適用于貼壁培養細胞。
1. 按照1:1000-10000用無血清培養基稀釋O91探針。
2. 去除細胞培養基，用PBS洗細胞一次。
3. 加入適當體積稀釋好的O91探針。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜，通常對于96孔板每孔加入200 μl染色液，六孔板的一個孔加入稀釋好的BO91探針不少于1毫升。
4. 在37℃細胞培養箱內避光孵育10-60分鐘。
5. 用無血清細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的O91探針。
6. 用PBS重懸細胞。
7. 檢測細胞熒光。
收集后標記：懸浮細胞或貼壁細胞消化處理
1. 按照1:1000-10000倍用無血清培養基稀釋 O91探針。
2. 離心移除培養基，用PBS洗細胞一次。
3. 細胞收集后懸浮于稀釋好的O91探針中，細胞濃度為1*106-2*107/毫升，37℃細胞培養箱內避光孵育10-60分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸。
4. 用無血清細胞培養基洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的O91探針。
5. 用PBS重懸細胞。
6. 檢測細胞熒光。
共聚焦/熒光顯微鏡/酶標儀檢測：
1. 對貼壁生長細胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下觀察；對懸浮生長細胞，取25-50μl細胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。
2. 熒光顯微鏡下，用藍光激發，觀察和拍攝細胞綠色發射圖像，缺氧損傷細胞綠色熒光強度增加。
流式細胞儀分析：
對貼壁生長細胞，用胰酶消化制備成單細胞懸液；對懸浮生長細胞，直接收集細胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重懸細胞（5~10萬）。
采用488 nm波長激發，測定500-526 nm的發射。
缺氧細胞有較強的綠色熒光強度增加。
