產品概述 product description
固定細胞蛋白提取試劑盒適用于從各種固定的細胞樣本中提取總蛋白，適用于乙醇固定、甲醛固定、多聚甲醛固定、其它混合固定液固定的細胞樣本。 提取過程簡單方便，提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。 提供針對動物細胞、組織、植物、真菌、酵母、微生物、藻類、液體、土壤等各種不同樣本的蛋白提取試劑盒。 可以提供針對細胞膜、核、胞質、線粒體、溶酶體、高爾基體、內質網、外泌體等細胞不同部位的蛋白提取試劑盒。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
一年
檢測方法
WB,IP等
適用樣本
動物細胞
產品應用
WB,IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項：
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
使用方法
1. 提取液制備：
每500ul蛋白提取液中加入5ul蛋白提取液B，混勻后備用。
2. 每1×107個細胞中加入500ul蛋白提取液，渦旋振蕩10秒。
3. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中100℃保溫20分鐘。
4. 渦旋振蕩10秒混勻。
5. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中60℃保溫1-2小時。
6. 渦旋振蕩10秒混勻。
7. 在12000×g條件下離心10分鐘。
8. 將上清吸入另一干凈離心管，即可得到總蛋白。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝保存備用或直接用于下游實驗。
每500ul蛋白提取液中加入5ul蛋白提取液B，混勻后備用。
2. 每1×107個細胞中加入500ul蛋白提取液，渦旋振蕩10秒。
3. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中100℃保溫20分鐘。
4. 渦旋振蕩10秒混勻。
5. 在恒溫器（Heat Block）或水浴鍋中60℃保溫1-2小時。
6. 渦旋振蕩10秒混勻。
7. 在12000×g條件下離心10分鐘。
8. 將上清吸入另一干凈離心管，即可得到總蛋白。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝保存備用或直接用于下游實驗。
常見問題分析
1.蛋白濃度低？
固定的細胞組織的蛋白質回收率較低，甲醛固定樣本回收率在30%左右。
需要加大細胞組織樣本上樣量，調整提取液用量來調整蛋白濃度。
2.WB做不出來？
固定樣本的蛋白質回收率在30%左右。低豐度蛋白通常較難檢出。
甲醛固定的蛋白質末端基團與甲醛之間形成交聯鏈，各種氨基，亞氨基及酰氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環等都會參與甲醛固定蛋白質的基團反應，在這個過程中，絕大部分常規的暴露抗原決定基團遭到破壞，從甲醛固定樣本回收的蛋白質做WB成功的概率較低，最好選用抗體說明書上同時可以做WB和IHC的抗體。
固定的細胞組織的蛋白質回收率較低，甲醛固定樣本回收率在30%左右。
需要加大細胞組織樣本上樣量，調整提取液用量來調整蛋白濃度。
2.WB做不出來？
固定樣本的蛋白質回收率在30%左右。低豐度蛋白通常較難檢出。
甲醛固定的蛋白質末端基團與甲醛之間形成交聯鏈，各種氨基，亞氨基及酰氨基，肽，胍基，羥基，SH和芳香環等都會參與甲醛固定蛋白質的基團反應，在這個過程中，絕大部分常規的暴露抗原決定基團遭到破壞，從甲醛固定樣本回收的蛋白質做WB成功的概率較低，最好選用抗體說明書上同時可以做WB和IHC的抗體。
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