產品簡介:
考馬斯亮藍G250 染料試劑
Bradford 法是常用的蛋白濃度檢測的方法,與傳統方法相比,更簡單、更穩定、兼容性更好。Bradford 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達 1M,DTT
的濃度可高達 5mM。但受高濃度的去垢劑的影響明顯, 故在用 Bradford Protein Assay Kit 進行蛋白定量時,需確保 SDS 低于 0.01%,Triton X-100低于 0.05%,Tween 20, 60, 80 低于 0.015%,含高濃度
去污劑的蛋白定量,建議采用 BCA Protein Assay Kit。
考馬斯亮藍 G250 染料試劑由考馬斯亮藍 G250、乙醇、磷酸組成,用于考馬斯染料結合(Bradford)分析的總蛋白測量,其特點在于對蛋白樣品中可能存在的大多數鹽、溶劑、緩沖液、硫醇、金屬螯合
劑、還原性物質等均不排斥。檢測濃度下限達到 25μ g/ml,最小檢測蛋白量達到 0.5μg,待測樣品體積為 1~20μl,在 50~1000μg/ml 濃度范圍內有較好的線性關系。
產品組成:
編號 名稱 |
YS0010 |
YS0010 |
Storage |
考馬斯亮藍 G250 染料試劑 | 100ml | 500ml | RT |
使用說明書 | 1 份 |
自備材料:
1、酶標儀或分光光度計
2、蒸餾水
3、96 孔板或比色杯
操作步驟(僅供參考):
1、稀釋蛋白標準(一般為 BSA 5mg/ml)使其終濃度為 0.5mg/ml。注意:蛋白樣品在什么溶液中,蛋白標準也應用什么溶液稀釋,也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀釋蛋白標準。
2、將標準品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl 加到 96 孔板的蛋白標準孔中,加蛋白標準稀釋液補足至 20μl。
3、加適當體積樣品到 96 孔板的樣品孔中,補加標準品稀釋液至 20μl。
4、各孔加入 200μl 考馬斯亮藍 G250 染料試劑,室溫放置 3~5min。
5、酶標儀測定 595nm 波長處的吸光值,560~610nm 之間的波長也可。
6、根據標準曲線計算出樣品中的蛋白濃度。
注意事項:
1、 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標準也應溶解于什么樣的稀釋液中,否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致,有可能導致測定不準確。
2、 需可檢測 560~610nm 之間波長的酶標儀一臺,最佳檢測波長為 595nm。
3、 建議每次測定時都做標準曲線。因為測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深,并且顯色反應的速度和溫度有關,所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度,否則如需精確測定應每次都做標準曲線。
4、 如果沒有酶標儀,也可以使用普通的分光光度計測定,但測定時,考慮根據比色皿的最小檢測體積。應按比例適當加大考馬斯亮藍 G250 染料試劑的用量使總體積不小于最小檢測體積,樣品和標準品的用量亦相應
按比例放大。使用分光光度計測定蛋白濃度時,每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。
5、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期: 12 個月有效。