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考馬斯亮藍G250染料試劑

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產品簡介:

考馬斯亮藍G250 染料試劑

Bradford 法是常用的蛋白濃度檢測的方法,與傳統方法相比,更簡單、更穩定、兼容性更好。Bradford 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達 1M,DTT

 

的濃度可高達 5mM。但受高濃度的去垢劑的影響明顯, 在用 Bradford Protein Assay Kit 行蛋白定量時,需確 SDS 低于 0.01%,Triton X-100低于 0.05%,Tween 20, 60, 80 低于 0.015%,含高濃度

 

去污劑的蛋白定量,建議采用 BCA Protein Assay Kit。

  

考馬斯亮藍 G250 染料試劑由考馬斯亮藍 G250、乙醇、磷酸組成,用于考馬斯染料結合(Bradford)分析的總蛋白測量,其特點在于對蛋白樣品中可能存在的大多數鹽、溶劑、緩沖液、硫醇、金屬螯合

 

劑、還原性物質等均不排斥。檢測濃度下限達到 25μ g/ml,最小檢測蛋白量達到 0.5μg,待測樣品體積為 120μl,在 50~1000μg/ml 濃度范圍內有較好的線性關系。

 

產品組成:

 

YS0010

 

YS0010

 

Storage

考馬斯亮藍 G250 染料試劑

100ml

500ml

RT

使用說明書

1 

自備材料:

1、酶標儀或分光光度計

2、蒸餾水

396 孔板或比色杯

 

操作步驟(僅供參考)

1稀釋蛋白標準(一般 BSA 5mg/ml)使其終濃度 0.5mg/ml。注意:蛋白樣品在什么溶液中,蛋白標準也應用什么溶液稀釋,也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀釋蛋白標準。

2、將標準品 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl 加到 96 孔板的蛋白標準孔中,加蛋白標準稀釋液補足至 20μl。

3、加適當體積樣品到 96 孔板的樣品孔中,補加標準品稀釋液至 20μl

4、各孔加入 200μl 考馬斯亮藍 G250 染料試劑,室溫放置 3~5min

5、酶標儀測定 595nm 波長處的吸光值,560~610nm 之間的波長也可。

 


6、根據標準曲線計算出樣品中的蛋白濃度。

 

注意事項:

1 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標準也應溶解于什么樣的稀釋液中,否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致,有可能導致測定不準確。

 

2、  需可檢測 560~610nm 之間波長的酶標儀一臺,最佳檢測波長為 595nm

 

3 建議每次測定時都做標準曲線。因為測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深,并且顯色反應的速度和溫度有關,所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度,否則如需精確測定應每次都做標準曲線。

 

4 如果沒有酶標儀,也可以使用普通的分光光度計測定,但測定時,考慮根據比色皿的最小檢測體積。應按比例適當加大考馬斯亮藍 G250 染料試劑的用量使總體積不小于最小檢測體積,樣品和標準品的用量亦相應

 

按比例放大。使用分光光度計測定蛋白濃度時,每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。

 

5、  為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

有效期: 12 個月有效。

 

 

 

 

 

 

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