產(chǎn)品概述 product description
CM-DiI細(xì)胞膜染色試劑盒是利用 M系列熒光探針進(jìn)行細(xì)胞膜特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的 DiI細(xì)胞膜染色探針為橙色熒光標(biāo)記的細(xì)胞膜探針，具有549 / 565nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。 M系列探針是對(duì)活細(xì)胞的細(xì)胞膜進(jìn)行選擇性染色的一類熒光染料，該系列探針可以選擇性標(biāo)記細(xì)胞膜。當(dāng)親脂性的熒光探針CM-DiI進(jìn)入細(xì)胞膜后，在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。染色液CM-DiI在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，被激發(fā)后可以發(fā)出橙色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。 熒光探針CM-DiI通常不會(huì)明顯影響細(xì)胞的活力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長(zhǎng)期示蹤劑（long-term tracer）。除了最簡(jiǎn)單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外，還可以用于檢測(cè)細(xì)胞的融合和粘附，檢測(cè)發(fā)育或移植過(guò)程中細(xì)胞遷移，通過(guò)FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）檢測(cè)脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散，檢測(cè)細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。M系列細(xì)胞膜探針具有多種顏色可以選擇，可根據(jù)情況對(duì)樣品進(jìn)行多色標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。除了本試劑盒的橙色熒光探針，還可以提供紅色、綠色、深紅色等顏色的染色試劑盒。 可以提供細(xì)胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細(xì)胞代謝、氧化應(yīng)激、細(xì)胞膜流動(dòng)性、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞耗氧率、細(xì)胞內(nèi)pH、細(xì)胞粘附、細(xì)胞自噬等數(shù)百種檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品。 可以為您提供各種顏色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、骨架、微管等細(xì)胞、細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒產(chǎn)品，以及鈣離子、鈉離子、氬離子等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品。 可以提供動(dòng)物、植物、微生物、酵母、水產(chǎn)、家禽、獸類、土壤等樣本的各種生化指標(biāo)檢測(cè)的數(shù)百種試劑盒產(chǎn)品。 以96孔板每孔200μl染色液計(jì)，本試劑盒小包裝可以染色1000-5000個(gè)樣本。
2.熒光染色劑為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短時(shí)間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
4.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！
2.離心機(jī)
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸頭
3.一次性手套
2.CM-DiI染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
3.使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)短離心使DMSO溶液集中于管底。
4.細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
5.標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳條件。以下方法僅供參考。
6.染色后立即進(jìn)行分析。
7.本染色液可用于細(xì)胞涂片、細(xì)胞的檢測(cè)。
根據(jù)樣本數(shù)量，用37℃培養(yǎng)箱預(yù)熱的HBSS或相應(yīng)的無(wú)血清培養(yǎng)基或其他緩沖液將 CM-DiI熒光染料進(jìn)行500-1000倍稀釋，配制成染色工作液。
2． 細(xì)胞染色
懸浮細(xì)胞染色
1) 用PBS洗滌細(xì)胞2次。
2) 加入適量體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度大約為1×106/mL。
3) 在37 ℃孵育細(xì)胞 5～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
4) 孵育結(jié)束，500×g離心5分鐘。
5) 傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
6) 重復(fù)（4），（5）步驟兩次以上
貼壁細(xì)胞染色
1) 用PBS洗滌細(xì)胞2次。
2) 細(xì)胞培養(yǎng)板中或細(xì)胞爬片上加入適量體積的染色工作液。
3) 37 ℃孵育細(xì)胞 5～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記結(jié)果。
4) 吸干染色工作液，用培養(yǎng)液洗培養(yǎng)板或蓋玻片2～3次，每次用預(yù)熱的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。
3． 用熒光顯微鏡/共聚焦或流式細(xì)胞儀檢測(cè)
激發(fā)波長(zhǎng)為549nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為565nm。
