細胞介紹
OVCAR-8/ADR為由OVCAR-8細胞構建的耐ADR藥物細胞株。
細胞特性
1） 來源：高級別卵巢漿液性腺癌 女 64歲
2） 形態：上皮細胞樣 貼壁生長
3） 含量：>1x106 細胞數
4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途：僅供科研使用。
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理
1. 收到細胞后，若發現培養瓶破損、漏液及細胞有污染；或凍存管有破損，融化、漏液等，請立即拍照并聯系我們。照片包括細胞培養瓶/凍存管外觀，顯微鏡下細胞照片（100倍，200倍各2張）；
2.若收到的復蘇細胞有少量細胞脫落、飄起，可能由于運輸途中導致。請先于37℃恒溫細胞培養箱中靜置2~3h后，再進行處理；
復蘇細胞的充液培養基為不含藥物的維持培養基，血清濃度較低，收到細胞后請及時更換為完全培養基；
3.建議收到細胞后，首先進行擴增（至少3代），并凍存部分細胞以備用。
4.初次培養，當細胞匯合度達約80%時，可加入400ng/mL ADR的完全培養基培養至細胞完全融合后傳代。細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至最大500ng/mL繼續培養；若此過程中細胞停止增殖，且狀態較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養基培養，至細胞匯合度達80%左右，且生長狀態較好時，再更換為所需的ADR藥物濃度。
5.細胞凍存過程中，不可添加藥物。
6.備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。
一．培養基及培養凍存條件準備
1. 準備RPMI-1640培養基；優質胎牛血清，10%；雙抗，1%
細胞培養試劑的配制
1）ADR藥物的配制及保存
建議將ADR藥物配制成1mg/mL的母液，即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR藥物，使其完全溶解后，使用0.22um濾器過濾除菌。
注意：可根據用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復凍融導致藥物失效。溶解后的Taxol，4℃保存1周，-20℃保存1個月，-80℃保存6個月。
2）凍存液的配制
90%優質胎牛血清+10%DMSO，現用現配。（凍存液中不含藥物）
3）完全培養基的配制（推薦使用h382-001b）
| 成分 | 體積/濃度 |
| 優質胎牛血清 | 10% |
| 雙抗 | 1% |
| 500ng/mL ADR | 0.05%母液（1mg/mL） |
| RPMI-1640培養基 | 補充至所需體積 |
2 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
細胞處理
1）凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養基重懸細胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養基的培養瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細胞培養箱中過夜培養。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
注意：①細胞復蘇過程中，不可使用含有藥物的培養基。須在細胞生長至匯合度達80%左右時，方可添加400ng/mL ADR藥物；若細胞生長狀態較為緩慢，可適當降低ADR的濃度（首次降低一半藥物濃度），或使用不含藥物的完全培養基培養至細胞生長狀態較好時，再更換為所需的ADR濃度。
②建議復蘇細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發生爆炸，造成人員傷害。
2）細胞傳代（建議以同等底面積的培養瓶/皿按照1：2比例傳代）
①待細胞密度達到80%~90%時，即可進行傳代培養。
②棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次，吸凈殘余的PBS。
③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化2~5min，顯微鏡下觀察細胞細胞大部分變圓并脫落，即可輕拍培養瓶至細胞全部脫落。迅速拿回操作臺，加入2倍體積的、含10%FBS的培養基中止消化。
④將細胞懸液移入離心管中，1000rpm/min離心5min，棄去上清液。
⑤向細胞沉淀中加入1~2mL完全培養基重懸細胞，輕吹混勻。將細胞懸液按1：1的比例均勻鋪于2個新的培養瓶/皿中，添加6~8mL完全培養基。
注意：細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至500ng/mL繼續培養；若此過程中細胞停止增殖，且狀態較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養基培養，至細胞匯合度約80%，且生長狀態較好時，再更換為所需的ADR藥物濃度。
3）細胞凍存
①細胞凍存時，步驟同2）細胞傳代的①~④，細胞計數后，加入配制好的細胞凍存液，重懸細胞，按照1×106 ~ 1×107個細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
注意：細胞凍存過程中，不可添加藥物。
②將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
