產品簡介：基底膜是動物體內上皮細胞基底面的一層基質膜。是從Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠腫瘤組織提取的基底膜成分，所形成的基質膠。該基質膠主要成分為laminin，collagen IV，heparan sulfate proteoglycans（Kleinman et al. 1986）。同時，該基質膠也包含多種生長因子，例如表皮生長因子EFG，血小板衍生生長因子PDGF，神經生長因子NGF，堿性成纖維細胞生長因子FGF-2，乙型轉化生長因子TGF-beta和胰島素樣生長因子ILGF（Vukicevic et al. 1992）。
產品來源：
Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠腫瘤基底膜成分
產品儲存：
建議您融化后先按照單次用量進行分裝，保存-20°C冰箱，有效期2年。
產品性質：
本品在4°C條件下為液態，但在加熱到37°C時呈凝膠狀態。基質膠凝固后，重新放回4°C過夜，基質膠可再次液化。
注意事項：
該基質膠在溫度高于10°C時就會開始凝固成膠，所以盡量在冰上操作基質膠。類器官傳代時，如果為了避免酶對類器官造成影響，可直接用4°C預冷的基礎培養基對基質膠進行緩慢吹打，即可將類器官從基質膠中釋放出來。
產品應用：
本品適用于類器官生長、分化、代謝和毒理學研究，體內和體外血管生成實驗。
操作方法：
一、腫瘤類器官藥敏實驗（操作所需時間為2小時）
1.將擴增好足夠量的腫瘤類器官（實驗組）以及正常類器官（對照組）用4°C預冷的基礎培養基進行重懸，緩慢機械吹打，促進膠液化溶解，并保持類器官結構完整（可用于懸浮培養于有5%基質膠溶液的基質膠表面）（Guillen et al. 2022）。或者通過TryplE酶消化獲得單細胞懸液。
2.離心收集類器官細胞，并進行細胞計數。
3.加入LYN基質膠原液，與細胞進行混勻。
4.將細胞與膠的混合物，通過排槍加入37°C預熱過的96孔板，或者384孔板，立即將孔板放入培養箱。
5.大約10min后，基質膠將凝固，加入相應體積的類器官培養液進行培養。
6.類器官形成后（如果是機械吹打，類器官將在傳代24h后就會形成；如果是酶消化，類器官會在3-5天后形成），每個孔分別加入含有PI染料以及不同種類、不同濃度的待篩選的抗腫瘤藥物。
7.用高內涵顯微鏡上進行活細胞成像，測定腫瘤類器官對各種藥物的敏感性。
二、血管生成實驗（以永生化HUVEC細胞系為例，操作所需時間為1小時）
1.將完全培養基換成饑餓細胞用培養基：加入含0.2% FBS，2mM L-谷氨酰胺，1mM丙酮酸鈉，100U/ml青霉素和100µg/ml鏈霉素的DMEM培養基培養24小時。
2.將基質膠均勻鋪滿96孔板底。注意：槍頭需提前預冷半小時。盡量在冰上操作，避免基質膠過早固化，避免氣泡產生。
3.將96孔板在細胞培養箱孵育30min，固化基質膠。
4.消化HUVEC細胞，并計數。
5.將200µL的HUVEC細胞懸液（含5X10^4個細胞）加于含基質膠的96孔板中。將96孔板放于培養箱。
6.血管樣網絡結構將于3至12小時間形成。
7.在血管網絡形成時，小心去除培養基，并用加入含活細胞染料1/1000 Calcein AM（綠色）的培養基進行染色，并用顯微鏡進行拍照記錄。
三、神經軸突3D生長實驗（以大鼠胚胎神經干細胞為例，操作所需時間為2小時）
1.取孕期12-15天的大鼠胚胎，用眼科剪和眼科鑷分離出大腦皮層于4°C預冷的DMEM培養基中。
2.用吸管輕緩吹打，然后用70µm濾網過來，獲得單細胞懸液，并進行細胞計數。
3.離心（300g，3min），棄上清。將細胞與基質膠進行混合，然后將基質膠混合物滴加在24孔板中，每孔50µl。
4.將24孔板放于培養箱，大約10min后，基質膠將凝固。加入1mL神經元分化培養基：Neurobasal medium，2% B27, 2mM L-glutamine，5%FBS，20ng/mL EGF和20ng/mL bFGF，100U/mL penicillin和100 µg/mL streptomycin。第二天開始，就能觀察到有明顯的神經軸突生長。
5.在第7天可觀察到大量的神經突（Neurite）長出。
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