產品簡介:基底膜是動物體內上皮細胞基底面的一層基質膜。該基質膠是從Engelbreth-Holm-Swarm(EHS)小鼠腫瘤組織提取的基底膜成分,所形成的基質膠。該基質膠主要成分為laminin,collagen IV,heparan sulfate proteoglycans(Kleinman et al. 1986)。同時,該基質膠也包含多種生長因子,例如表皮生長因子EFG,血小板衍生生長因子PDGF,神經生長因子NGF,堿性成纖維細胞生長因子FGF-2,乙型轉化生長因子TGF-beta和胰島素樣生長因子ILGF(Vukicevic et al. 1992)。
產品來源:
Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) 小鼠腫瘤基底膜成分
產品儲存:
建議您融化后先按照單次用量進行分裝,保存-20°C冰箱,有效期2年。
產品性質:
本品在4°C條件下為液態(tài),但在加熱到37°C時呈凝膠狀態(tài)。基質膠凝固后,重新放回4°C過夜,基質膠可再次液化。
注意事項:
該基質膠在溫度高于10°C時就會開始凝固成膠,所以盡量在冰上操作基質膠。類器官傳代時,如果為了避免酶對類器官造成影響,可直接用4°C預冷的基礎培養(yǎng)基對基質膠進行緩慢吹打,即可將類器官從基質膠中釋放出來。
產品應用:
本品適用于以無飼養(yǎng)層方法進行人胚胎干細胞hES、誘導多能干細胞ips的擴增和維持。
操作方法:
人胚胎干細胞hES和誘導多能干細胞ips無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法(操作所需時間為1小時)
1.將基質膠于4°C冰箱里的冰浴中過夜解凍,并用預冷的槍頭,對基質膠進行緩慢吹打5次,進行混勻。注意不要產生氣泡。如產生氣泡,通過掌上離心機低速短暫離心去除氣泡。
2.將細胞培養(yǎng)板放置于培養(yǎng)箱預熱。
3.用預冷的槍頭將解凍的基質膠進行分裝。
4. 用4°C預冷的無血清培養(yǎng)基將基質膠原液以1:100的比例進行稀釋,然后將基質膠稀釋液均勻鋪開并完全覆蓋培養(yǎng)板。推薦修飾培養(yǎng)板所用的基質膠稀釋液的量為300µL/cm2。
5.將含有修飾液的培養(yǎng)板在室溫靜置一小時。
6.吸掉修飾液,并在培養(yǎng)板上立即種上干細胞與培養(yǎng)基(mTeSR1)混合液。注意一定不要讓修飾過的培養(yǎng)板表面變干。