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人血管成纖維細胞GM00882

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 1. 請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液

2. 請立即將細胞培養瓶從包裝盒中取出,并按照下方操作步驟進 行培養傳代
注意:如為凍存管,請收到后立即解凍培養。若來不及解凍,請 儲存于液氮中(存儲于負80度,會降低細胞存活率)對于貼壁培養的細胞,寄送前,我們會將培養基充滿整個培 養瓶,以減少產品運輸過程中貼壁細胞的脫落。
1. 收到細胞產品后,請注意觀察是否有污染。將培養瓶置于倒置 顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因在運輸過程中存 在顛簸,且有些細胞對溫度變化也很敏感,可能存在一些細胞脫 落漂浮的情況,這些細胞仍是活細胞,請勿丟棄,可離心富集后 傳代使用。
2. 對于貼壁的細胞,在生物安全柜環境中,用真空泵去除培養瓶 中的多余培養基,至剩余5-8mL左右,隨后將細胞置于含有5%CO2 的37℃恒溫 培養箱中培養,擰松瓶蓋。如果細胞已經長滿培養瓶 請立即傳代。
3. 對于懸浮的細胞,在生物安全柜環境中,轉移培養瓶中的細胞 至離心管中,離心200×g / 5 - 10 min,去除上清后,用5 mL培養基 吹散細胞,轉移至新的培養瓶中,隨后置于含有5% CO2 的37℃恒 溫培養箱中培養。
凍存細胞操作步驟
注意:為保存細胞的高存活率,請收到產品后,立即解凍培養。
1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動,迅速解凍。為避免污染, 確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速,大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后,立即取出,采用 70%酒精噴拭凍存 管表面。從此步開始,后續操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉移到含有5mL完全培養基的離心管中, 離 心200×g / 5 - 10 min,用真空泵去除含有凍存液的上清。
4. 用完全培養基重新懸浮細胞并轉移到新的培養瓶中。為保證 細胞復蘇的存活率,請將培養基在37℃水浴預熱后使用。
5. 將細胞置于含有5%CO2 的37℃恒溫培養箱中培養。
貼壁細胞傳代培養
1. 吸取并棄掉培養瓶中培養基,加入PBS洗滌一次。
2. 加入 1.0 mL 0.25(w/v)Trypsin-0.53mM EDTA溶液,并置于37 ℃培養箱中孵育,直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3 至5分鐘(此處為12.5 cm2 培養瓶所用體積,可根據實際情況增減 用量)。
3. 加入2mL完全培養基中和胰蛋白酶,并輕輕吹打將細胞從培養 瓶表面吹落,并使細胞分散。
4. 離心200x g/5 min,去除上清后,取適量的培養基將細胞重懸, 取適量懸液置于新的培養瓶中,并加入新鮮細胞完全培養基至總 體積為4mL。
5. 將細胞置于含有5%CO2 的37℃恒溫培養箱中培養。 傳代比例:建議 1:2 至 1:3(以培養瓶底面積計算) 培養基換液: 每隔 2 至 3 天。 
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