R28大鼠視網膜前體細胞
培養說明書
一、細胞培養條件
| 細胞名稱 | R28大鼠視網膜前體細胞 | ||
| 生長特性 | 貼壁生長 | 凍存條件 | 無血清凍存液 |
| 培養體系 | DMEM+15 mL sodium bicarbonate+50 mL calf serum +5 mL MEM non-essential amino acids +5 mL L-glutamine + 5 mL Anti-Anti | ||
| 傳代方法 | 第一次建議1:2 | 傳代情況 | 2天換液 |
| 備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養基，留作過渡對比培養 如果對比培養效果不好，建議直接購買我們的完全培養基 | ||
二、細胞收貨后處理
A、復蘇細胞處理方法：培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，嚴格無菌后將細胞瓶放置培養箱中靜置2-4小時以穩定細胞狀態。靜置后顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。
B、凍存細胞處理方法：收到細胞后，觀察泡沫箱中干冰是否有剩余，凍存管是否完好無損是否有解凍情況，若發現干冰完全汽化或凍存管有解凍破損現象，請及時拍照并與我們聯系。如果細胞簽收三天內未與我們聯系，則默認為收貨良好。復蘇第一管如有活性問題，請及時聯系我們，技術人員與您溝通指導后再復蘇第二管，未與我方聯系擅自復蘇第二管出現問題不予售后。
三、細胞培養步驟
a、細胞傳代：如細胞密度超80%，即可進行傳代培養，步驟如下：
1) 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次；
2) 加1-2mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置培養箱中消化 1-2min ，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后，加5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化；
3) 輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出至離心管中，1000 rpm離心5-8min，棄去上清液，補加1-2mL完全培養基后吹勻；
4) 按5-6mL每瓶補加完全培養基，將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 mL完全培養基的6cm培養皿中或者T25培養瓶中。
（即1個T25瓶傳代接種至2個T25瓶或者2個6cm的培養皿）
b、細胞凍存：細胞收集參照傳代步驟，按凍存數量（推薦每支凍存管5×106左右細胞數量凍存），加入1ml的我司無血清凍存液（貨號：C7001），輕輕混勻后，放-80℃冰箱，24小時后轉入液氮罐中。
C、細胞復蘇：從液氮灌或-80℃冰箱中找到需要復蘇的細胞，水浴鍋提前打開預熱37℃。
1) 將凍存細胞在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2) 將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養基的離心管中，1000 rpm離心5min；
3) 棄去上清液，補加5mL完全培養基后吹勻，接種于T25培養瓶中（或6cm皿中），培養過夜，第二天換液并檢查細胞密度。
四、注意事項：有些細胞貼壁不牢，在運輸過程中細胞容易脫落，這是正常現象。如脫落較多可將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm離心5-8min，收集上清作過渡培養，沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml完全培養基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml完全培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代，補充新的完全培養基至5-6ml/瓶，最后放入細胞培養箱中培養。
