| 質粒宿主： | 枯草桿菌 |
|---|---|
| 質粒用途： | 蛋白表達 |
| 片段類型： | ORF |
| 片段物種： | |
| 原核抗性： | Amp |
| 篩選標記： | Ery,Spe |
| 熒光標記： | |
| 啟動子: | |
| 復制子: | |
| 拷貝數: | |
| 感受態: | Stbl3 |
| 溫度: | 37度 |
一、擴增流程
收到產品后，請先根據產品管壁標簽來判斷產品形式，并在擴增前準確查找該質粒菌株的抗性、感受態和培養溫度。
（一）干粉質粒
產品規格：0.5μg質粒干粉，保證能轉化出來，不保證具體含量，請務必先轉化進感受態，再挑單菌落提取后再使用。
保質期限：90天，請盡快轉化。
保存溫度：一般在-20°C，置于-80°C保存時間更長。
運輸方式：常溫運輸，1周內。
注意事項：轉化前請準確查找該質粒相應的抗性、抗性濃度、感受態名稱和培養溫度。
使用說明：
1、收到質粒干粉后請先5000rpm離心1min,再加入20μl無菌水溶解質粒，室溫放置1min；
2、從-80°C冰箱中取出相應的感受態，置于冰盒上解凍，并做好標記；
3、取2μl質粒加至100μl感受態中，冰浴30min;
4、42°C熱激90s，再冰浴2min;
5、加入900μl無抗的LB液體培養基，180rpm震蕩培養45min;
6、6000rpm離心5min，僅留100μl上清混勻菌體沉淀；
7、混勻后的菌液加至對應抗性的LB平板上，倒入適量玻璃珠，涂勻液體；
8、將平板正向培養1h，再倒置培養12h～16h;
9、挑取單克隆菌落至對應抗性的LB液體培養基中，震蕩培養12h~16h，根據實驗需要提取質粒。
注意：如果第二天轉化平板長的過多，請將質粒按比例稀釋后再轉化。
（二）甘油菌種（冰袋運輸，存于-80℃，保質期90天，請務必劃線挑單克隆培養）
產品規格：甘油菌種。
保質期限：90天，請盡快劃線培養。
保存溫度：-80℃。
運輸方式：冰袋運輸，1周內。
注意事項：培養前請準確查找該菌種的抗性、抗性濃度和培養溫度。
使用說明：
1、收到甘油菌種后請甩動保存管，讓菌液不要吸附在管壁上；
2、用接種環在固體平板上四區劃線，如有抗性就加對應抗性；
3、恒溫培養箱倒置培養12~16h；
4、挑取單菌落接種于液體培養基中，如有抗性就加對應抗性；
5、搖床震蕩培養12~16h，根據實驗需要保存甘油菌，酵母加30% 甘油，其它一般加15%甘油。
注意：務必要四區劃線挑單菌落培養。
（三）穿刺菌種（冰袋運輸，存于4℃，保質期7天）
穿刺接種，液體培養后四區劃線，再挑單菌落液體培養。
4、菌落平板（冰袋運輸，存于4℃，保質期7天）
直接挑取單菌落至液體培養基中。
5、液體質粒（冰袋運輸，存于-20℃，保質期90天）（強烈推薦委托我們大提）
單獨提取的液體質粒收到后可直接使用。
6、濾紙質粒（常溫運輸，存于-20度，保質期90天，請務必先轉化提質粒后使用）
收到貨后將濾紙畫圈部分剪下放入EP管中，加100ul無菌水將濾紙浸濕并浸泡5min，吸取5ul質粒轉化，離心全涂。
7、常用抗生素推薦濃度：
二、轉化圖片
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