產(chǎn)品概述 product description
細(xì)菌裂解液采用優(yōu)質(zhì)原料配制，用于細(xì)菌菌體的裂解，用于細(xì)菌蛋白提取，裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western等下游實(shí)驗(yàn)。 本裂解液提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。 本裂解液提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。 本裂解液中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。 本裂解液提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。 可以提供針對動物細(xì)胞、組織、植物、真菌、酵母、微生物、藻類、液體、土壤等各種不同樣本的蛋白提取試劑盒。 可以提供針對細(xì)胞膜、核、胞質(zhì)、線粒體、溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、外泌體等細(xì)胞不同部位的蛋白提取試劑盒。
保存溫度
2-8℃
注意事項(xiàng)
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
2.蛋白酶抑制劑從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
1年
檢測方法
WB、IP等
適用樣本
細(xì)菌
產(chǎn)品應(yīng)用
WB、IP等
儀器準(zhǔn)備
1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS緩沖液 （pH7.4，實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
2.蛋白定量試劑盒
2.蛋白定量試劑盒
耗材準(zhǔn)備
離心管
吸頭
一次性手套
吸頭
一次性手套
使用注意事項(xiàng)
1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
2.實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
3.蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
4.如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
5.可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
2.實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
3.蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
4.如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
5.可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
使用方法
1. 裂解液的準(zhǔn)備：
根據(jù)所需要提取的樣本量，每500ul裂解液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2. 在4℃， 10000g條件下將菌液離心5min，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體.
3. 用PBS洗菌體2次。若為冷凍菌體直接進(jìn)行下面操作步驟即可。
4. 按每50-100mg濕重菌體樣本加入500ul裂解液，吹打混勻，置搖床室溫振蕩30-45分鐘。
5. 在4℃， 10000g條件下將裂解液離心5分鐘，將上清移入干凈離心管。
6. 即得到細(xì)菌蛋白樣品。
7. 將細(xì)菌總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。
根據(jù)所需要提取的樣本量，每500ul裂解液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2. 在4℃， 10000g條件下將菌液離心5min，棄上清，盡量吸干剩余液體，收集菌體.
3. 用PBS洗菌體2次。若為冷凍菌體直接進(jìn)行下面操作步驟即可。
4. 按每50-100mg濕重菌體樣本加入500ul裂解液，吹打混勻，置搖床室溫振蕩30-45分鐘。
5. 在4℃， 10000g條件下將裂解液離心5分鐘，將上清移入干凈離心管。
6. 即得到細(xì)菌蛋白樣品。
7. 將細(xì)菌總蛋白樣品定量后分裝置于-80℃冰箱或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。
常見問題分析
1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
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