| 傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 傳代情況 | 2天換液 |
| 來源 | 8歲男孩甲狀腺癌細胞組織 | ||
細胞收到后處理
培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。（傳代后建議一瓶用原瓶的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基，以便進行對比培養，換液擰松瓶蓋）
細胞培養步驟
a、細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，留5ml完全培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養，
1）對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1-2ml至培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上完全培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，使之完全脫落后吸出，然后將懸液轉移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL完全培養基重懸。
4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的細胞培養箱中培養。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2的比例分到新的含8ml完全培養基的新瓶中。
方法二：可選擇半換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2比例分到新的含8ml完全培養基新瓶中。
b、細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄T25培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；
3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。
4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細胞轉入液氮罐中，則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上再轉入液氮罐中。
C、細胞復蘇：
1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、棄上清，沉淀用5ml完全培養基重懸，接種至T25培養瓶，放于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養；第二天，換用新鮮完全培養基繼續培養。
注意事項：有些細胞貼壁不牢，在運輸過程中發生容易細胞脫落，這是正常現象。可將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養（后期對比培養），沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml完全培養基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml完全培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。
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