實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人新布尼亞病毒抗體(NBV-Ab)表達。用純化的人新布尼亞病毒NBV-Ab)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中新布尼亞病毒抗體(NBV-Ab)相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的新布尼亞病毒抗體(NBV-Ab)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，與CUTOF℉值相比較，從而判定標本中人新布尼亞病毒抗體(NBV-Ab)的存在與否。
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
2.加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50u。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40，然后再加待測樣品10。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50ul,輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50山，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450m波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算和結果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00：陰性對照平均值<0.10臨界值(CUT OFF)計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值<臨界值(CUT OFF)者為新布尼亞病毒抗體(NBVAb)陰性陽性判定：樣品OD值≥臨界值(CUT OFF)者為新布尼亞病毒抗體(NBV-Ab)陽性
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