細(xì)胞詳述:腎靜脈,起自腎門,在同名動脈前方橫向內(nèi)側(cè)注入下腔靜脈,越過腹主動脈前面,并接受左腎上腺靜脈和左睪丸(卵巢)靜脈。平滑肌細(xì)胞的生長能力為原發(fā)血管疾病的重要異常因素;平滑肌細(xì)胞能夠表達(dá)鈣通道及ICAM-1和VCAM-1,其參與血管壁的炎癥反應(yīng),并與血管疾病的進(jìn)展和穩(wěn)定相關(guān)。
三、使用方法 大鼠海綿體平滑肌細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈成纖維細(xì)胞樣,標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞可傳3-5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳;建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實驗 。 客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度 的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化 1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng) 瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變 圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化; 3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5 mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng); 4)待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實驗 因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培 養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因 沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml ),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
四、注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于溝通;由于運輸?shù)脑,個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳 盡告知細(xì) 胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。