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K599 Chemically Competent Cell

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 K599 Chemically Competent Cell是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。K599發(fā)根農(nóng)桿菌(NCPPB2659)含有pRi2659農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,具有廣泛的宿主范圍(葫蘆科,豆科,茄科等),同時(shí)具有鏈霉素抗性。

基因型

 Agrobacterium rhizogenes (strR ) pRi2659 (agropine type)

K599 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

發(fā)根農(nóng)桿菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)農(nóng)桿菌屬(agrobacterium)的一種革蘭氏陰性土壤細(xì)菌,它能夠感染大多數(shù)雙子葉植物和少數(shù)單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。K599發(fā)根農(nóng)桿菌(NCPPB2659)含有pRi2659農(nóng)桿堿型Ri質(zhì)粒,具有廣泛的宿主范圍(葫蘆科,豆科,茄科等),同時(shí)具有鏈霉素抗性。本公司生產(chǎn)的K599化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pCAMBIA2301質(zhì)粒(卡那霉素抗性)檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率>10cfu/μg DNA。

常規(guī)操作方法

1.取-80℃保存的K599發(fā)根農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。

2.  每100μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手快速、劇烈管底混勻或用槍吹吸混勻,依次放于冰中靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

3. 冰浴中拿出放室溫,加入700μl 無抗生素的TY液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2小時(shí)。

4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌,留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 TY平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3 天

● 農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方:

 

常用農(nóng)桿菌抗性: (R:抗;S:敏感。)

● TY配方(1L):

Tryptone                5g

Yeast extract          3g

補(bǔ)水到1L體積,*溶解后,121度、20分鐘高溫滅菌

配制1M的氯化鈣水溶液,121度、20分鐘高溫滅菌

每1L 滅菌的TY液體營(yíng)養(yǎng)液中加入10ml 無菌的1M氯化鈣水溶液即可。

若配制TY固體培養(yǎng)基,則加入15g 瓊脂粉。

注意事項(xiàng)

1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。

2. 混勻質(zhì)粒時(shí)應(yīng)用手指快速管底或用槍吹吸混勻,務(wù)必使質(zhì)粒快速、均勻分散開,與感受態(tài)細(xì)胞充分接觸。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

3. 平板上陽性克隆密度過大時(shí),由于營(yíng)養(yǎng)不足,陽性克隆生長(zhǎng)變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量或降低涂板的菌量。

4.  K599具有鏈霉素抗性,不可用于具有鏈霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

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