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AGL1（pSoup） Chemically Competent Cell100μl/支￥ 1800.00100 個
AGL1(pSoup) Chemically Competent Cell
產品規(guī)格
AGL1(pSoup)： 100μl/支
pGs2（control vector，10ng/μl ) 10μl
保存條件(保質期)： -80℃（12個月）
基因型
C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine (pSoup-tetR)
AGL1(pSoup) Chemically Competent Cell產品說明
AGL1(pSoup)菌株為C58, RecA型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif和羧芐青霉素抗性基因carb，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型Ti質粒 pTiBo542DT-DNA，此質粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件， pTiBo542DT-DNA質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移）。在AGL1菌株中轉入help質粒：pSoup即為AGL1 (pSoup)菌株，可幫助pGreen，62SK，pGs2系列質粒在農桿菌中復制，同時賦予該菌株四環(huán)素（tet）抗性。適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。本公司生產的AGL1 (pSoup)化學轉化感受態(tài)細胞經特殊工藝制作，pGs2(卡那霉素抗性)質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。
2. 每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質粒DNA（轉化效率較高，次使用前做預實驗確定所加質粒的量），用手打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
（當平板只含有50 μg/ml kan 時，28℃培養(yǎng)48 h即可；平板中同時加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 時，需28℃培養(yǎng)60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90 h）。
注意事項
1. 加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10；質粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
2. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量，本公司生產的AGL1 (pSoup)化學轉化感受態(tài)細胞具有四環(huán)素抗性，但在轉入目標質粒涂板篩選陽性克隆時，只需加入目標質粒抗性的抗生素，不加四環(huán)素。
3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質粒用量。
4. 利福平濃度不應高于25 μg/ml，過高的利福平濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。
5. 培養(yǎng)基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌；根據所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止Ti質粒丟失，但鏈霉素不利于農桿菌的轉基因操作，培養(yǎng)農桿菌時不考慮鏈霉素或慶大霉素，Ti質粒丟失的概率極低 (可以忽略)。
試驗前請仔細閱讀說明書，本產品僅供科研實驗使用。
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4、產品已使用（質量問題除外）。
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