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YM4271 Chemically Competent Cell100μl/支￥ 1280100 個
YM4271 Competent Cell: 100μl/支 保存： -80℃（3個月）
pGADT7 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存：-80℃（12個月）
Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存：-20℃（12個月）
PEG/LiAC: 5ml 保存： 4℃（12個月）
基因型
MATa, ura3–52, his3-Δ200, ade2–101, ade5, lys2–801, leu2–3,112, trp1–901, tyr1–501, gal4Δ, gal80Δ, ade5::hisG
YM4271 Chemically Competent Cell產品說明
YM4271菌株，MATa型，可直接轉化質粒或與MATα型酵母菌株EGY48、Y187等通過mating操作進行蛋白互作驗證或篩庫試驗。Transformation marker為：trp1，leu2，ura，報告基因為： HIS3。可用于酵母雙雜，酵母單雜或異源蛋白表達等試驗。YM4271感受態細胞經特殊工藝制作，-80℃可保存三個月，pGADT7質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取100 µl冰上融化的YM4271感受態細胞，依次加入預冷的目的質粒2-5 µg，Carrier DNA (95-100℃，5 min，快速冰浴，重復一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl并吸打幾次混勻，30℃水浴30 min (15 min時翻轉6-8次混勻)。
2. 將管放42℃水浴15 min (7.5 min時翻轉6-8次混勻)。
3. 5000 rpm離心 40 s棄上清，ddH2O 400 µl 重懸，離心 30s棄上清。
4. ddH2O 50 µl重懸，涂板，29℃培養48-96 h。
注意事項
1. 感受態細胞在冰上融化。
2. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。
3. 同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。
4. YM4271酵母菌株對高溫敏感，適生長溫度為27-30℃；高于31℃，生長速度和轉化效率呈指數下降。
5. 菌落變粉不是污染，是酵母細胞生長中一個常見現象。當細胞在平板培養幾天后，平板上的Adenine被酵母消耗完畢，酵母試圖通過自身代謝途徑合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破壞，Adenine合成途徑受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中間產物P-ribosylamino imidazole (AIR) 在細胞中積累而使菌落變為粉紅色。
6. 酵母在缺陷培養基中生長速度比YPDA培養基慢，培養基中缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板29℃，48 h培養可見直徑1 mm克隆；涂SD單缺平板29℃，48-60 h培養可見直徑1 mm克隆，涂SD雙缺平板29℃，60-80 h培養可見直徑1 mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培養可見直徑1 mm克隆。
試驗前請仔細閱讀說明書，本產品僅供科研實驗使用。
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