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NoveBlue(DE3) Chemically Competent Cell

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                     NovaBlue(DE3):                                        100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

基因型

F`proA+B+ lacIZΔM15::Tn10 (TetR)] endA1 hsdR17(rk12-,mk12+) supE44 thi -1 recA1 gyrA96 relA1 lac(DE3)

 

NoveBlue(DE3) Chemically Competent Cell

產品說明

NovaBlue(DE3)來源于K12菌株,具有*的轉化效率,是轉化效率高的原核表達菌株,可同時用于普通質粒的構建和蛋白的原核表達。NovaBlue(DE3)菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區,使得NovaBlue(DE3)菌株可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,廣泛用于pET系列,pGEX,pMAL等質粒的蛋白表達。NovaBlue(DE3)菌株具有四環素抗性,endA1和recA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取;lacZΔM15的存在使NovaBlue(DE3)可用于藍、白斑篩選。生產的NovaBlue(DE3)感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率達109cfu/μg DNA。

 

操作方法

1. NovaBlue(DE3)感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上(若質粒濃度較高,也可稀釋后涂板,務必保證能在平板上挑到單克隆菌落)。

 

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

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