尿蛋白定性有生理性的,也有病理性,其陽性程度與腎損害程度不一定成正比。糖尿病患者尿中持續出現尿蛋白陽性,除外泌尿系感染、原發性腎病外,應考慮糖尿病腎病的診斷。有專家認為,糖尿病腎病早期蛋白尿呈間歇性,只在勞動或運動后為陽性反應。因此,運動后尿蛋白檢驗對診斷糖尿病腎病的早期發現有一定的意義。
一、測定原理:
在酸性介質中,CBB 與蛋白質的 NH3+基團結合引起由棕色到蘭色的顏色變化,在 595nm 處有最大吸收峰。
二、試劑組成:(試劑盒有效期 6 個月)
試劑一:CBB 試劑 60mL×1 瓶, 4℃保存。用時按 CBB 試劑:蒸餾水=1∶4 比例(即 5 倍稀釋)配制成 CBB 應用液,現用現配。
試劑二:524mg/L 蛋白標準液 0.5mL×1 支,4℃可保存 1 個月(-20℃冷凍保存,可存放 6 個月)。
三、所需儀器及試劑:
可見光分光光度計及 1cm 光徑比色皿(或酶標儀(595nm)及 96 孔板),渦旋混勻器,蒸餾水。
六、注意點:
1、樣本蛋白濃度過低時可適當加大取樣量(如取樣 0.1 或 0.2mL,同時標準品應稀釋 2 倍或 4 倍后和樣本量體積一致,計算時標準品濃度除以相應的稀釋倍數后再代入計算),而 CBB 應用液量不變;
2、測定管 OD 值過高時(測定 OD 減去空白 OD 后的差值比標準 OD 減空白 OD 的差值的 2 倍還大的)要將樣本用生理鹽水作一定稀釋后(稀釋后選擇測定 OD 值接近標準 OD 值對應的稀釋倍數)再測;
3、尿蛋白定量測試盒 (CBB法)也可用酶標儀來讀數(如在反應液靜置 5 分鐘后從每管中各取 0.2mL 到 96 孔板中(注意不要加入
氣泡),595nm 處讀數),計算公式不變。
免責聲明 ....: 測試前請仔細閱讀說明書,預試后再進行批量實驗,否則由此導致的后果用戶自行承擔!
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