僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。

 

人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體

(Flu A-H1N1 IgG)定性檢測試劑盒（ELISA） 說明書

使用前，請務必仔細閱讀說明書。

【產品名稱】

通用名稱：人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG) 定性檢測試劑盒（ELISA） 

【包裝規格】

48 人份/盒，96 人份/盒 

【預期用途】

僅供科研使用，定性檢測血清、血漿、細胞培養上清液中人新型甲型H1N1 流感病毒（2009） IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG)

的濃度。

【檢驗原理】

本試劑盒采用間接法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被新型甲型H1N1流感病毒

（2009）抗原的微孔酶標板中，加入人新型甲型H1N1流感病毒（2009）IgG抗體(Flu A-H1N1 IgG)陰陽性性對照和待測樣本，溫育洗滌，再加入另一株 HRP 標記的抗人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG抗體（酶標抗體），經過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗-酶標抗體的復合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，產生藍色產物，在終止液（2M硫酸）作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀上測定吸光度（OD

值），吸光度（OD 值）與待測樣品中人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG抗體(Flu A-H1N1 IgG)的濃度正相關，通過計算公式判斷樣品陰陽性。

【主要組成成分】主要成分

組分	數量	主要成分
陰性對照	0.5ml/管	不含待測物的緩沖液
陽性對照	0.5ml/管	含待測物的緩沖液
包被微孔板	48T	預包被固相抗原
HRP 標記抗體	3mL	HRP 標記的檢測抗體
樣本稀釋液	3mL	緩沖液

底物液 A	3mL	過氧化脲工作液
底物液 B	3mL	TMB 工作液
終止液	3mL	硫酸稀釋液
20×濃縮洗滌液	20mL	含 0.15%Tween20 的 PBS
說明書	1 份	--
自封袋	1 個	--
不干膠	2 片	--

陰陽性對照已經通過測試，結果表明 HBs 抗原陰性，HIV1、HIV2 和HCV 抗體陰性，由于不存在一種試驗方法能夠完全保證沒有這些物質，本品必須按照具有潛在的感染性進行處理，處理過程應當遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

1、能夠檢測 450 nm 吸光度的酶標儀。

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水或去離子水

4、洗瓶或者自動洗板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、1L 量筒

7、無粉一次性乳膠手套

8、稀釋用聚丙烯試管

【儲存條件及有效期】

1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期 6 個月。

2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回 2-8℃冰箱。

3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和 HRP 標記抗體，有效期為 28 天，其他成分在標簽標明的有效期內是穩定的。

【適用儀器】

半自動的酶標儀，如 Thermo MK3，或者國產酶標儀。

【樣本要求】

樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。1、細胞培養上清：4000rpm 條件下離心 20min，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在-

20℃以下，避免反復凍融。

2、血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm 條件下離心 20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復凍融。

3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在 4000rpm 條件下，離心 20 分鐘取上清， 血漿保存在-20℃以下，避免反復凍融。

本保存和穩定性

樣本在 2-8℃條件下，可以儲存 72h，或者在- 20℃儲存 6 個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【試劑準備】

1、使用前，所有的組分都要至少復溫 30min，確保充分復溫到室溫。

2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結晶產生，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按 1:20 稀釋，即 1 份的濃縮洗滌液，添加 19 份的蒸餾水。

3、底物：底物液 A 和 B，在使用前，按 1:1 體積充分混合，混合后 15 分鐘內使用。

操作程序

1、所有試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質控品和樣品，建議做復孔。

2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。

4、設置標準品孔、樣本孔和空白孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL，樣本孔加待

測樣本 50μL，空白孔不加。

5、除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體 100μL。

6、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

7、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。

8、如此重復 4 次（共洗板 5 次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡 20s 的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。

9、將底物 A 和B 按1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 15min。

10、所有孔加入終止液 50μL，在酶標儀上讀取各孔吸光度（OD 值）。

【檢驗結果的解釋】

檢測完成后，以陰性對照的 OD+0.25，做為閾值，樣本 OD 值大于閾值，為陽性；樣本OD 值低于閾值為陰性。

【檢驗方法的局限性】

1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

2、在試劑盒標示的有效期內使用，過期產品不得使用。

3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

5、如果樣本值高于標準曲線最高濃度，請用檢測緩沖液稀釋樣本，并重新檢測。如果細胞培養上清樣本需要較大的稀釋倍數，請用細胞培養基進行適度稀釋。

6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結果，檢測前，請排除該因素。

7、通過其他方法得到的檢測結果，與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。

【產品性能指標】1、物理性能

試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。

2、陰性結果

陰性對照的 OD 值不高于 0.2。3、陽性結果

陽性對照的 OD 值不低于 0.8。4、特異性

本試劑盒識別天然和重組人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG)，與結構類似物無交叉。

5、穩定性

2℃-8℃保存，有效期 6 個月。

【注意事項】生物安全

1、檢測必須符合實驗室管理規范的規定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有 proclin-300 防腐劑，可能引起皮膚過敏反應，避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后徹底洗手。

4、試劑盒中的終止液為酸性溶液，在使用終止液時，請佩戴防護服，及防護眼睛、手及面部的設施。

5、本試劑盒用于科學研究，不能用于診斷治療。

6、請不要使用其他批號或其他來源的試劑替代本試劑盒中的試劑。

技術要點

1、重溶或者混合蛋白溶液時，避免起泡。

2、加標準品與樣本時，每個標準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加

樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結果準確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體，保存過程中變為藍色，代表底物溶液已經失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產物，會瞬間變為黃色。

6、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

廢物處理

所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應當遵循傳染性或潛在傳染性產品的處理程序，每個實驗室都有責任根據其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處 理，同時要嚴格依照有關規定對待所有的廢物和污物。