組織來源 | 口腔 | 細胞類型 | 表皮細胞 |
備注 | 該細胞系培養所用基本培養基為 Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM), 配置完全培養基時需加入10%FBS,1% Anti-Anti。藥物抗性維持加藥濃度為40nmTaxol。 用無菌離心管收集瓶子培養基,留作過渡培養 |
培養瓶中細胞操作步驟
對于貼壁培養的細胞,寄送前,我們會將培養基充滿整個培養瓶,以減少產品運輸過程中貼壁細胞的脫落。
1. 收到細胞產品后,請注意觀察是否有污染。將培養瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因在運輸過程中存在顛簸,且有些細胞對溫度變化也很敏感,可能存在一些細胞脫落漂浮的情況,這些細胞仍是活細胞,請勿丟棄,可離心富集后傳代使用。
2. 對于貼壁的細胞,在生物安全柜環境中,用真空泵去除培養瓶中的多余培養基,至剩余5-8mL左右,隨后將細胞置于含有5%CO的37℃恒溫 培養箱中培養,擰松瓶蓋。如果細胞已經長滿培養瓶請立即傳代。
3. 對于懸浮的細胞,在生物安全柜環境中,轉移培養瓶中的細胞至離心管中,離心200×g / 5 - 10 min,去除上清后,用5 mL培養基吹散細胞,轉移至新的培養瓶中,隨后置于含有5% CO 的37℃恒溫培養箱中培養。
凍存細胞操作步驟
注意:為保存細胞的高存活率,請收到產品后,立即解凍培養。
1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動,迅速解凍。為避免污染,確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速,大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后,立即取出,采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始,后續操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉移到含有5mL完全培養基的離心管中, 離心
4. 用完全培養基重新懸浮細胞并轉移到新的培養瓶中。為保證細胞復蘇的存活率,請將培養基在37℃水浴預熱后使用。
5. 將細胞置于含有5%
1. 請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液
2. 請立即將細胞培養瓶從包裝盒中取出,并按照下方操作步驟進行培養傳代
注意:如為凍存管,請收到后立即解凍培養。若來不及解凍,請儲存于液氮中(存儲于負80度,會降低細胞存活率)200×g / 5 - 10 min,用真空泵去除含有凍存液的上清。CO 的37℃恒溫培養箱中培養。
貼壁細胞傳代培養
1. 吸取并棄掉培養瓶中培養基,加入PBS清洗一次。
2. 加入 1.0 mL 0.25(w/v)Trypsin-0.53mM EDTA溶液,并置于37℃培養箱中孵育,直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘(此處為12.5 cm2培養瓶所用體積,可根據實際情況增減用量)。
3. 加入2mL完全培養基中和胰蛋白酶,并輕輕吹打將細胞從培養瓶表面吹落,并使細胞分散。
4. 離心
5. 將細胞置于含有5%傳代比例:建議 1:2 至 1:4(以培養瓶底面積計算)培養基換液: 每隔 2 至 3 天。
注意:
耐藥細胞,需先無藥培養穩定后保種再進行加藥培養,按照3次梯度加藥:最大劑量1/4,最大劑量1/2,最大劑量。